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前言内镜下全层结扎上消化道壁技术,主要用于直径小于12mm上消化道固有肌层肿瘤的治疗。多为平滑肌瘤和问质瘤,是消化系统常见的病变。消化道固有肌层肿瘤的治疗,大体包括:外科开腹手术切除、腹腔镜介入下切除及内镜下结扎治疗,几种方法各有优势。对于较小肿瘤(直径≤12mm),内镜下结扎方法较佳,其创伤小、恢复快,费用低。目前消化道固有肌层肿瘤的内镜下结扎治疗已在临床上应用数年,并取得了较好效果,已有较多文献进行报导。但在固有肌层肿瘤结扎后的结扎瘤观察大都是定期胃镜下胃内观察,观察结扎瘤的脱落和黏膜层的愈合情况,而没有结扎处消化道壁愈合的微观观察结果。本试验是从病理学角度微观的观察消化道壁全层结扎后,结扎处愈合过程。即结扎瘤脱落时和脱落后结扎处的愈合状态对比,观察结扎瘤脱落时间和浆膜粘连时间,评估结扎的风险、探讨结扎治疗术的安全性和可靠性。实验材料1、实验动物普通实验狗、体重大约15-20kg,由中国医科大学附属盛京医院动物实验室提供。2、主要试剂maiyers苏木素;75%、80%、85%、90%、95%、100%酒精;二甲苯;1%曙红(伊红、广州齐云生物制品公司);1%盐酸酒精;PBS(枸橼酸缓冲液);苦味酸复红;3%双氧水;一抗(武汉博士德公司);二抗(Sigma公司);3、实验设备普通胃镜:Pentax EG2940;结扎器:空气驱动式结扎器(单环释放器);负压吸引器;病理钳、异物钳、注射器等;4、化验设备显微镜OLYMPUSBX41型;切片机SHANDON finess;全自动脱水机SHANDON thermo Electron型;石蜡包埋机LeicaEG1150H;冰箱;温箱;恒温摊片烤片机TK-218VIH;石蜡切片用冷台ZH-3H;电热鼓风干燥箱HN101-2AD;实验方法(1)将4只实验狗随机编号为:A、B、C、D。将实验狗行内镜下上消化道壁全层结扎术。每条实验狗每日结扎1次,次日结扎时同时观察前1次结扎瘤变化情况,第3次结扎时同时观察前2次结扎瘤变化情况,以此类推。直至首次结扎瘤脱落,并延续至首次结扎后1周时结扎结束。麻醉下处死实验狗,取实验狗的胃结扎处消化道壁全层置于10%福尔马林溶液中,标记结扎后的时间。(2)选择结扎部位取材,石蜡包埋并切片。分别行HE染色;Van Gieson(胶原纤维)染色法;免疫组化染色:SP法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)。(3)电子显微镜下观察切片,统计胶原蛋白含量及毛细血管数量,使用计算机Bandscan灰度分析软件分析部分实验结果,形成定量比较。实验结果(1)内镜下观察结扎后不同时间结果:上消化道壁全层结扎术后,结扎瘤脱落时间平均为3-4天。脱落后,黏膜面观察为1处较深溃疡,1周后,溃疡愈合为红色瘢痕。(2)结扎处取材切片染色后观察结果:上消化道壁全层结扎术后,结扎部位胶原蛋白含量及毛细血管数量,1-3天内显著升高,至第3-4达高峰,5-7天出现持续状态。即结扎处两侧浆膜层间3-4天即可发生稳固粘连。结论(1)上消化道壁全层结扎后,在结扎瘤脱落前,浆膜层已发生粘连。因此,结扎瘤脱落后,消化道不会发生穿孔。(2)实验狗消化道壁全层结扎后,局部毛细血管数量和胶原蛋白含量于3-4天达高峰,其后进入平台期。