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万寿菊,菊科,万寿菊属,具有重要观赏价值和经济价值。病毒诱导的基因沉默技术,作为一门新兴的技术,在植物基因功能研究中发挥着重要作用。本课题系统地建立了万寿菊的VIGS体系,为其他菊科植物病毒诱导的基因沉默技术平台的建立奠定了理论和技术基础。本课题的主要研究成果有以下几个方面:(1)基于烟草脆裂病毒的万寿菊VIGS病毒载体的构建。成功克隆了417bp的万寿菊PDS基因片段,并构建了基于TRV系统的万寿菊VIGS::空载和VIGS::Te PDS载体。(2)子叶期万寿菊植株的VIGS体系建立与优化。以子叶期万寿菊为实验材料,采用真空渗透的方法,获得了Te PDS基因沉默的植株。菌液浓度OD600值分别为0.5、1.0、1.5和2.0时,-25k Pa的渗透压强下,处理5min,子叶期的万寿菊幼苗均可以达到良好的基因沉默效果;综合评价真空渗透压强(-25k Pa、-50k Pa和-100k Pa)和渗透时间(2min、5min和10min)对子叶期转化的影响,确定了最适宜的渗透强度为-25k Pa,渗透时间为10min。(3)万寿菊叶片VIGS体系建立的研究。将菌液浓度OD600设置为0、1.0、2.0和4.0,采用压迫注射的方法处理第4对真叶,VIGS::空载和VIGS::Te PDS处理的万寿菊植株叶片均出现泛黄的现象而无白化表型。(4)万寿菊花器官VIGS体系的建立与优化。采用茎部注射、灌根和真空渗透的方法处理第4对真叶期的万寿菊,并观察叶片和花蕾的表型。灌根处理的无任何转化表型,茎部注射和真空渗透处理的均有叶片白化现象而花蕾无变化。采用茎部注射法处理2、3、4、5和6对真叶时期的万寿菊,处理部位上方出现部分叶片白化,而花蕾均无白化现象。单次和两次注射万寿菊花蕾的基部(花托和花梗),万寿菊均出现叶片白化表型,而仅有15%的两次注射万寿菊花蕾出现萼片白化表型。