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L-天冬氨酸在医药工业、食品、农业和生化试剂等有广泛用途。本文以代谢控制发酵理论为指导,重点对L-天冬氨酸产生菌进行摇瓶培养和发酵条件的初步优化。主要研究内容结果如下:
利用HPLC-ELSD法定量测定发酵液中L-天冬氨酸含量。色谱条件为:PrevailC18柱,0.06%HFBA水-乙腈溶液(80:20)为流动相,柱温25℃,流速为0.9mL/min,EL,SD漂移管温度110℃,气体流量2.8 L,/min。L-天冬氨酸在0.8-3.2mg/mL范围内,线性回归比非常显著(R2=0.9968),平均回收率达到100.4%。该法简便、快速、准确性高、重复性好,适合于L-天冬氨酸的定量分析。
研究菌株的摇瓶分批发酵条件。应用正交设计实验和单因素实验得到种子培养基和发酵培养基的配比,优化后种子培养基为(g/L):玉米粉2.5,葡萄糖5,MgSO4.7H2O5,NaCl5,pH7.0~7.2,0.1MPa30min;优化后发酵培养基为(g/L):水解麦麸60,MgSO4·7H2O4,K2HPO4·3H2O2.96。并对种子培养条件和发酵培养条件进行了研究,优化后种子培养条件为:初始pH7.0~7.2,装液量50mL/500mL三角瓶,摇瓶转速为200r/min,培养温度为32℃,种龄为16h。优化摇瓶发酵培养条件为:发酵培养基初始pH7.2,装液量40 mL/500mL三角瓶,摇瓶转速为200r/min,发酵温度为32℃,接种量为3%。在优化条件下,菌株摇瓶分批发酵72h,产 L-天冬氨酸9.523g/L。
对菌株进行了5L罐发酵初步研究,考察不同搅拌转速及不同恒定pH值对菌株产L-天冬氨酸分批式发酵的影响,确定了最佳搅拌转速500r/min与最适pH6.8,产率最高达12.74g/L。