白细胞介素2(Interleukin-2，IL-2)主要是由T细胞和NK细胞等产生的15.5～17.2Ku的糖蛋白。IL-2是细胞免疫应答过程中的一个初始因子，在免疫学中起着非常重要的作用，其最重要的功能是诱导T淋巴细胞增殖和分化，并且具有刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞分泌细胞因子等功能。目前，在国内人的重组IL-2己在临床上得到广泛的应用，但对重组猪IL-2的研究较少。为了研究和开发猪IL-2用于相关疫病的治疗或预防，我们首先克隆了猪IL-2基因，然后利用基因工程技术在巴斯德毕赤酵母中进行表达、纯化和分析研究。 1.本研究采用刺激诱导技术和RT-PCR技术，从外周血单个核细胞中成功克隆到猪IL-2基因，其全长465bp，共编码154个氨基酸残基的前体蛋白，分子量约为17.24Ku。分析表明：克隆的猪IL-2基因序列与参考序列的同源性为98％，与人、牛、狗的同源性较高，而与鸡的同源性较低。 2.将猪IL-2基因和真核表达载体pPIC9K同时酶切构建重组表达载体，转化JM109菌后，提取重组表达质粒pPIC9K-IL-2。采用限制性内切酶SalI将重组质粒pPIC9K-IL-2线性化后，通过电击法将其转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中，并用G418抗性梯度筛选法，获得高拷贝重组菌株，然后利用1％甲醇进行诱导表达，经SDS-PAGE电泳分析表明：在摇床水平中表达出约17Ku大小的分泌性目的蛋白。 3.通过对pH、温度和溶氧水平等发酵工艺条件的调整，将高拷贝重组毕赤酵母菌株在5L发酵罐中进行间断补料高密度发酵，将表达上清液进行SDS-PAGE和薄层扫描分析，目的蛋白占上清总蛋白含量的70％以上，诱导96小时的目的蛋白表达量高达1.95g/L。采用SephadexG-100分子筛层析对其表达产物进行分离纯化，纯化结果理想，这为今后采用酵母表达系统大规模高效分泌表达和纯化IL-2，开展其结构与功能研究奠定了基础，同时也为猪重大疫病的有效预防和控制提供了技术和物质支持。