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目的:辅助性T细胞（Th细胞）向Th2分化是支气管哮喘发病的重要过程。研究表明在静止的T淋巴细胞上无法检测到胰岛素受体,而向体外培养的T淋巴细胞中加入胰岛素后可以促使T淋巴细胞的活化分化。然而,参与哮喘的活化T淋巴细胞是否表达胰岛素受体,与哮喘炎症是否相关尚未阐明。本研究旨在探讨哮喘中活化的T淋巴细胞表达胰岛素受体的情况及其与哮喘炎症的关系,为进一步研究胰岛素受体在哮喘发病中的作用机制以及哮喘精准防治提供理论依据。方法:1.分组及模型建立。将20只6-8周龄,体重18-20g的健康雌性C57bl/6小鼠随机分配为数量相等的2组,包括正常对照组和OVA哮喘模型组。OVA哮喘组每只小鼠于实验第0天、第7天和第14天经腹腔注射0.2ml OVA混合溶液致敏,其中包含50μg OVA和20μl AL（OH）3,以及180μl磷酸盐缓冲液（PBS缓冲液）。实验第21天至27天将小鼠放入透明的雾化装置中,然后用浓度为3%的OVA溶液超声雾化持续激发30分钟,每天1次。正常对照组在相同时间使用等剂量PBS缓冲液致敏和激发。最后一次雾化激发后24小时以内取材,收集肺组织、肺泡灌洗液（BALF）和血清标本。2.小鼠哮喘模型评估。（1）小鼠气道阻力值的测定:使用梯度浓度的乙酰甲胆碱溶液作为小鼠的支气管激发剂,利用肺功能仪来测定气道阻力值。（2）肺组织病理切片及苏木素-伊红染色（HE染色）:取小鼠的左肺下叶,经过标本固定,组织脱水、透明、渗透、包埋和制作病理切片,用HE染色法观察对比两组小鼠肺组织的病理学变化,评估小鼠肺部炎症状态。（3）过碘酸雪夫氏染色（PAS染色）:用过碘酸和雪夫试剂处理石蜡切片,可以使肺组织中支气管黏膜上的杯状细胞被染成紫红色,从而在显微镜下能够观察到杯状细胞的增生状况以此了解哮喘的发生情况。（4）酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中Th1/Th2型细胞因子的水平及血清中免疫球蛋白E（Ig E）的水平:收集两组小鼠的BALF和血清,离心取上清液,使用ELISA试剂盒,检测两组小鼠BALF中Th2型细胞分泌的白细胞介素4（IL-4）、Th1型细胞分泌的干扰素-γ（IFN-γ）及血清中Ig E的含量。3.检测两组小鼠肺组织胰岛素受体分布以及T淋巴细胞胰岛素受体表达的情况。（1）石蜡切片免疫组化法观察胰岛素受体分布在肺组织中的分布情况:取组织石蜡切片进行抗原修复,经过胰岛素受体免疫组化抗体以及二步法通用型免疫组化试剂盒孵育后,使用二氨基联苯胺（DAB染色液）覆盖组织使抗原抗体复合物显色,封片后可以观察到胰岛素受体在肺组织的分布情况,并对比两组组织切片胰岛素受体的分布情况。（2）肺组织单细胞悬液的收集:取剩余的肺组织,剪碎至肉泥状,加入浓度为2.5mg/ml的IV型胶原酶并放至37℃恒温箱震荡消化,然后放到300目尼龙过滤网上轻轻研磨,收集到离心管中。用红细胞裂解液裂解掉细胞液中的红细胞,离心取细胞沉淀,用PBS缓冲液重悬后进行细胞计数。（3）流式细胞术检测肺组织中T淋巴细胞胰岛素受体表达情况:将细胞悬液的细胞数量稀释到1×10~6/100μl。分别设置空白对照管,CD4流式荧光抗体单染色对照管,IR流式荧光抗体单染色对照管。向各流式管加入荧光标记的抗细胞表面特异性抗原的CD4-FITC荧光单克隆抗体（FITC-conjunction CD4）,4℃避光环境中反应20分钟,用冰PBS洗涤3次后,加入固定/透化溶液在4℃避光环境反应20分钟。加入渗透/洗涤溶液离心洗涤后加入IR-PE荧光单克隆抗体（PE-conjunction IR）,4℃避光环境反应30分钟。最后用适量含4%多聚甲醛的溶液振荡重悬,保存于4℃冰箱中待流式细胞仪上机进行检测。4.统计学方法处理。本实验所有数据采用SPSS26.0统计学软件分析方法,正态分布计量资料采用两独立样本均数t检验分析比较组间差异,结果使用（?）±s表示;采用直线相关分析探索胰岛素受体表达数量与气道阻力值、细胞因子IL-4水平之间的关系,p<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1.小鼠气道阻力测定的结果。在浓度为6.25mg/ml、12.5mg/ml和25mg/ml的乙酰甲胆碱溶液激发后,得到的哮喘组小鼠特殊气道阻力值明显高于正常对照组（p<0.05）。2.肺组织切片HE染色结果比较。使用OVA致敏和激发后的C57bl/6小鼠与正常对照组小鼠进行对比,气道上皮明显增厚、管腔变窄以及支气管周围聚集了大量的炎性细胞。PAS染色结果观察到哮喘组小鼠气道黏膜上被染成紫红色的杯状细胞,并且对比正常对照组明显增生。3.两组小鼠BALF的Th1/Th2型细胞因子含量比较。哮喘组小鼠Th2型细胞因子IL-4的含量较正常对照组升高,而IFN-γ的含量较正常对照组减少,差异具有统计学意义（p<0.01）。4.两组小鼠血清Ig E的含量比较。哮喘组血清Ig E含量较正常对照组升高,差异具有统计学意义（p<0.01）。5.两组小鼠肺组织T淋巴细胞胰岛素受体表达情况。免疫组化法观察到胰岛素受体在哮喘组小鼠肺组织中阳性表达的细胞数和面积较正常对照组表达明显增多。流式细胞术结果表明哮喘组小鼠肺组织中的T淋巴细胞表达胰岛素受体,并且两组小鼠T淋巴细胞胰岛素受体表达存在差异,哮喘组小鼠的肺组织T淋巴细胞胰岛素受体表达较正常对照组明显增多（p<0.01）。6.相关性分析的结果。哮喘组小鼠胰岛素受体表达量与特殊气道阻力值、细胞因子IL-4水平均呈线性正相关（r=0.978、0.936,p<0.01）。结论:（1）参与支气管哮喘炎症的T淋巴细胞表达胰岛素受体,并且有可能是T淋巴细胞被激活的标志之一;（2）支气管哮喘发病时,T淋巴细胞表达胰岛素受体水平与气道阻力的增加呈正相关;（3）支气管哮喘发病时,T淋巴细胞表达胰岛素受体水平与Th2分化程度呈正相关。