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实验目的：本实验室在用对肿瘤细胞有特异性杀伤作用的细小病毒H1(parvovirus H1)对肝脏肿瘤细胞杀伤的过程中得到了一株对细小病毒具有抗性的单克隆,通过基因芯片分析技术,分析了肝癌细胞及其细小病毒抗性株基因表达谱的差异,发现了在细小病毒抗性细胞株中Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂6(Serine Protease Inhibitor Kazal-type6, SPINK6)基因表达明显上调。这一结果说明SPINK6很有可能在抑制肿瘤发生的某些进程中发挥了一定的作用,因此有必要对其生物学功能进行进一步研究。本实验的目的即为通过上调SPINK6在肝癌细胞系中的表达,确定SPINK6的肝脏肿瘤细胞的抑制作用。实验方法：本实验通过两种实验方法使得SPINK6基因在细胞中实现高表达。第一种方法是利用pcDNA3.1(+)载体构建搭载spink6基因的质粒转染肝癌细胞QGY-7703。第二种方法是利用重组人5腺病毒载体构建搭载spink6 基因感染肝癌细胞QGY-7703。使用荧光定量PCR确定SPINK6基因在细胞内的高表达,用CCK8试剂盒进行生长曲线的测定,用软琼脂克隆形成实验来测定细胞的克隆形成能力,用划痕实验、Transwell实验来检测细胞的迁移浸润能力。通过以上几种实验方法检测SPINK6基因高表达对肝脏肿瘤细胞的抑制。实验结果：pcDNA3.1 (+)-spink6质粒经酶切、测序等方法鉴定,构建成功,转染细胞后荧光定量PCR确认细胞中SPINK6基因在细胞内能够有较高表达,转染该质粒后,CCK8生长曲线显示细胞生长有所减缓,克隆形成实验显示细胞克隆形成能力减弱,划痕实验和Transwell实验显示细胞迁移浸润的能力也同样有较大幅度的减弱。重组腺病毒pAd-spink6感染细胞后,荧光定量PCR确认细胞中SPINK6基因在细胞内能够有较高表达。感染该重组腺病毒后,CCK8生长曲线显示细胞生长有所减缓,克隆形成实验显示细胞克隆形成能力减弱,划痕实验和Transwell实验显示细胞迁移浸润的能力也同样有较大幅度的减弱。这些实验结果初步证明SPINK6基因对于肿瘤细胞的生长、迁移、浸润有一定的抑制作用,为SPINK6基因功能、作用机制及应用的进一步研究打下了基础。