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目的：
研究透明质酸修饰的丝素-壳聚糖(Silkfibmin-Chitosan/Hyaluronicacid,SF-CS/HA)支架对大鼠颌下腺细胞(Rat submandibular gland cells,RSMG-cells)黏附、增殖及分泌的影响。
方法：
使用冻干法制备壳聚糖(Chitosan,CS)支架、丝素-壳聚糖(Silkfibroin-Chitosan,SF-CS)支架以及透明质酸修饰的丝素-壳聚糖(Silkfibroin-Chitosan/Hyaluronicacid,SF-CS/HA)支架。组织块法原代培养3d龄的大鼠颌下腺细胞,将纯化的大鼠颌下腺细胞分别与CS支架、SF-CS支架、和SF-CS/HA支架共同培养,免疫组化鉴定细胞来源,采用扫描电镜、Hoechst染色荧光显微镜下观察颌下腺细胞与支架的附着情况,检测各组中细胞上清液中唾液淀粉酶含量的差异,应用MTT法对比三种支架对细胞增殖的影响。所得实验数据应用SPSS13.0统计软件进行处理,计量资料用(-x±s)表示,组间差异比较采用单因素方差分析,以α=0.05,P＜0.05为差异有统计学意义。
结果：
扫描电镜观察SF/CS-HA支架:支架为多孔三维结构,孔隙大小在100-200μm之间。第7天时可见颌下腺细胞伸展在SF/CS-HA支架中的网状结构内,黏附的细胞伸出足突,细胞间有微绒毛相联系,细胞表面有许多分泌颗粒和丝状纤维。大鼠颌下腺细胞与SF-CS/HA支架复合培养1h后开始附着于支架上,4h附着率达70%,8h达90%以上,24h时有95%左右的颌下腺细胞粘附。而在SF-CS组和CS组,黏附率在各个时间段上与SF-CS/HA组差异明显,黏附速率要显著慢于SF-CS/HA组。Hoechst荧光染色观察到相对于SF-CS组和CS组,细胞在SF-CS/HA组中不仅黏附数量要多于SF-CS组和CS组,并且细胞间联系和细胞活力更加良好。通过MTT法检测发现大鼠颌下腺细胞与SF-CS/HA支架复合培养5d、7d后增殖迅速,而11d、13d和15d细胞几乎没有增殖。SF-CS/HA组的细胞在7d、9d和10d增殖速度要比SF-CS和CS组更为显著(p＜0.01,n=3)。细胞培养上清液中的淀粉酶分泌量随着培养时间有不同程度的增加,SF-CS/HA组在3d、5d、7d、9d唾液淀粉酶浓度与SF-CS组和SF组相比有明显差异(p＜0.001,n=3)。
结论：
与CS支架、SF-CS支架相比,大鼠颌下腺细胞能够在SF-CS/HA支架上更好地黏附、增殖,并且保持很好的分泌功能。