用壳聚糖/胶原复合支架构建工程化心肌组织的实验研究

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心衰是目前临床上患者众多又仍然未解决的一个难题,随着组织工程成熟地发展,其为心衰的治疗提供了越来越多的解决方法。心肌组织工程主要是将具有功能性的心肌细胞与降解或不降解支架材料进行复合,来修复受损心肌。本文初步探索将初生大鼠心室细胞为种子细胞种植到壳聚糖/胶原复合支架上进行体外组织工程化心肌组织构建的可行性。用9:1比例的壳聚糖、胶原混合,制成壳聚糖/胶原复合支架,在上面种植新生大鼠的心肌细胞,构建工程化心肌组织。通过场发射扫描电镜观测复合支架的形貌特征,结果显示此支架的孔隙率高达90%,孔之间连通性好,且孔径普遍达200-400μm左右,尺寸适合心肌细胞贴附。细胞培养时,采用胶原涂层法对照观测胶原对细胞的生长贴壁情况,用台盼蓝染色法进行活细胞计数,并通过倒置相差显微镜进行细胞生长情况的监测。对照结果证明胶原层的存在利于细胞培养时收集到纯度更高的心肌。然后,通过MTT检测及电生理特性信息收集,体外构建的工程化心肌组织上的心肌细胞活性在1至7天逐渐增加,说明心肌在复合支架材料上贴附生长。力学刺激观测壳聚糖/胶原复合支架材料上的生长情况得出在壳聚糖支架对心肌细胞培养的可行性。拉伸试验显示出所构建的工程化心肌组织具有一定的收缩能力。通过实验证明壳聚糖可以作为支架材料成分进行体外心肌组织的构建。
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