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沙门菌病是引起养殖业的主要细菌病之一,禽畜感染沙门氏菌可引起相应的传染病,如猪霍乱、鸡白痢等,而且该菌污染肉类食品后,可进入人类食物链而引发人类食物中毒,对人类的健康有着巨大的威胁。本试验目的在于研究双组份信号转导系统cpx AR对鼠伤寒沙门菌致病性的调控作用,为控制其严重的致病性寻找出路,也为减毒活疫苗的研究奠定基础。1.本研究通过ERIC-PCR、MLST分型技术筛选流行克隆株JS_分,应用噬菌体转导技术构建基因缺失突变株JS_分△cpx R,并进行Js标、JS_标△cpx R、JS_分、JS_分△cpx R小鼠致病性试验。LD50结果显示:JS_标△cpx R突变株与亲本株Js标相比,LD50升高了1.36倍,JS_分△cpx R突变株与亲本株Js分相比。LD50升高了17.54倍,基因缺失突变株LD50均升高。上述试验结果表明:cpx R基因与细菌毒力具有紧密的相关性,影响着细菌的致病特性。2.测定标准菌JS_标、JS_分及其缺失株JS_标△cpx R、JS_分△cpx R黏附、侵袭PK—15细胞的能力。结果表明:流行克隆株JS_分的黏附、侵袭力很强,其黏附力、侵袭力均高于标准菌株。缺失cpx R后,受试菌黏附、侵袭能力均显著下降,本试验中标准菌株、流行克隆cpx R缺失后的对PK-15细胞的黏附量分别较缺失前的亲本菌株分别降低了1.35、2倍,侵袭量分别降低了3.4、3倍,表明cpx R基因与鼠伤寒沙门菌黏附侵袭能力密切相关。3.通过荧光定量PCR技术,对7株不同来源的菌株及其cpx R基因缺失株的11个相关毒力基因的m RNA表达水平进行的检测,结果表明:鼠伤寒沙门菌中与毒力相关的基因hil D、sop D、fur、inv A、sop E2、ssr A、spv C、hil A、inv F、sop B、sip A在JS_标△cpx R的m RNA表达量与JS_标相比总体呈下降趋势,然而在临床分离菌cpx R基因缺失株6△cpx R、18△cpx R、25′△cpx R、35△cpx R、57△cpx R、69△cpx R、110△cpx R号菌株中的相对表达量与6、18、25′、35、57、69、110号菌株相比较,fur、spv C在临床菌株cpx R缺失株中呈总体下降趋势,而sip A、hil A、inv F、sop B、hil D、sop D、inv A、sop E2、ssr A在6△cpx R、18△cpx R、25′△cpx R、35△cpx R中呈小幅下降趋势,在57△cpx R、69△cpx R、110△cpx R号菌株中表达量却上升及其显著,高至354.6倍,变化呈现多样性,提示cpx R基因与鼠伤寒沙门菌的致病性有密切关系,但在临床分离菌中,其毒力或致病力差异较大,调控鼠伤寒沙门菌毒力基因表达的不仅仅是cpx R,还可能存在与cpx R的调控机制密切相关的复杂的调控网络。