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目的:本研究通过完全弗氏佐剂诱导大鼠类风湿关节炎,观察壮药龙钻通痹颗粒对大鼠血清中Ras、Raf1蛋白含量、大鼠滑膜组织Ras、Raf1的蛋白表达水平、大鼠滑膜组织中Hras、Raf1基因转录水平以及关节滑膜组织病理变化的作用,探讨壮药龙钻通痹颗粒对类风湿关节炎的作用机制。方法:选取健康雄性SD大鼠96只,适应性喂养1周后,随机选择其中72只大鼠用风寒湿加生物因子复合造模方法复制RA模型,其余24只为正常组。72只大鼠免疫后第7d依据右后足趾肿胀度判定造模是否成功,将造模成功大鼠随机分为模型组、西药组、壮药组,每组24只。壮药组予壮药龙钻通痹颗粒按设定剂量灌胃给药,甲氨蝶呤组按照规定剂量灌胃给药,同时模型组、正常组胃饲生理盐水。每只大鼠均按1ml/100g容量灌胃。每组分别在给药7d、14d、21d、停药后一周(首次给药后28d)四个时段测量大鼠右后足趾肿胀度,同时每组每时段取6只大鼠采集大鼠血清及滑膜组织。采用ELISA测定血清中Ras、Raf1、p-raf1蛋白含量;采用RT-q PCR检测大鼠滑膜组织中Hras、Raf1基因转录水平;以足趾肿胀度为疗效判定指标,选择疗效最佳时段所取材的组织进行Western Blot实验,测定滑膜组织Ras、Raf1、p-raf1蛋白相对表达量;同时对此时段大鼠踝关节进行组织病理HE染色分析。结果:1.大鼠足趾肿胀度:72只造模大鼠免疫后第3d后足开始出现红肿症状。免疫后第7d只造模大鼠的关节红肿逐渐明显,出现关节变形,足趾厚度高于正常对照组,提示模型复制成功。给药第14d,与模型组比较,西药组、壮药组足趾肿胀度均有下降,在给药后第3周两组大鼠肿胀程度降至最低。2.血清ELISA检测结果:在四个不同时间段,正常组、模型组、西药组、壮药组血清Ras、Raf1、p-raf1含量无明显区别(P>0.05)。3.RT-q PCR检测结果:与正常组相比,四个时段模型组动物滑膜组织Hras、Raf1 m RNA相对表达量均上调;与模型组相比,在给药后14d、21d及28d壮药龙钻通痹颗粒组、西药组Hras、Raf1 m RNA相对表达量较模型组降低(P<0.05),四个时段壮药组西药组两者Hras、Raf1 m RNA相对表达量无差异(P>0.05)。4.Western Blot检测结果:给药第21d,与正常组相比,模型组大鼠滑膜组织Ras、Raf1、p-raf1蛋白相对表达量上调,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,壮药龙钻通痹方颗粒和西药组滑膜Ras、Raf1、p-raf1蛋白相对表达下调,经统计学分析,下调存在差异(P<0.05)。5.HE病理染色结果:通过对给药后第21d RA大鼠踝关节HE染色分析,模型组大鼠较正常组大鼠病理评分升高(P<0.01)。与模型组比较,壮药组及西药组大鼠病理总评分下降(P<0.05),西药组和壮药组之间病理总评分无明显差异。结论:壮药龙钻通痹颗粒治疗RA作用机制可能通过下调滑膜组织中Hras、Raf1 m RNA的转录水平,下调滑膜组织中Ras、Raf1蛋白的表达从而起到减少滑膜病变及骨保护的作用。