分别应用寡核苷酸亲和层析法,改进后的寡核苷酸亲和层析法和离心管层析法从TPA诱导后的食管癌细胞EC109中分离调控NGAL诱导表达的TPA反应激活蛋白,通过EMSA、SDS-PAGE结合银染判定这三种方法的优缺点,并应用生物质谱结合生物信息学等手段对这些蛋白进行初步鉴定。寡核苷酸亲和层析法能够分离纯化一定丰度的TPA反应激活蛋白,但存在较多Tween 20的干扰;离心管层析法操作流程简单,快捷,但获得的激活蛋白较少,不利于下一步的质谱鉴定;改进后的寡核苷酸亲和层析法排除了Tween 20的干扰,能够分离纯化低背景、高丰度的激活蛋白。通过生物质谱并结合生物信息学等手段分析,初步筛选出12个调控NGAL诱导表达的TPA反应激活蛋白,这其中大部分为尚未报道的新型TPA反应激活蛋白。通过本实验,建立了稳定的改进后寡核苷酸亲和层析法技术平台,并初步筛选出12个调控NGAL表达的新型TPA反应激活蛋白。