细胞—巨噬细胞集落刺激因子及其受体在白血病细胞中的性质和作用

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:D_boy85
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巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)是造血系统细胞因子调控网络中的一个重要成员,其受体(M-CSF-R)为原癌基因c-fms编码产物,具有酪氨酸激酶活性。M-CSF具有多功能性和表达产物多样性的特点,M-CSF至少有可溶性M-CSF(s-M-CSF)、膜结合型M-CSF(m-M-CSF)和基质结合型M-CSF(PG-M-CSF)三种异型体,随后研究表明某些肿瘤细胞的胞质和胞核可出现M-CSF及其受体[称为细胞M-CSF(cellular M-CSF)及其受体],为探讨这些异型M-CSF及其受体在白血病细胞中的作用,采用免疫酶标技术和流式细胞记数分析了白血病细胞系中细胞M-CSF及其受体的表达和性质,结果显示:四株人白血病细胞系同时高表达细胞M-CSF及其受体;正常人单个核细胞(PBMC)不表达M—CSF及其受体,经PHA诱导后则表达较低水平的M-CSF及其受体。与PHA诱导的PBMC比较,J6-1、J6-2、HL-60和K562细胞的膜结合型M-CSF(m-M-CSF)及其受体(M-CSF-mR)蛋白表达的阳性细胞百分率增高;它们的胞内(胞质和胞核)M-CSF蛋白(cn-M-CSF)表达的阳性细胞百分率也明显增高,有统计学意义;J6-1、J6-2和HL-60细胞的胞内M-CSF-R(M-CSF-cnR)蛋白表达增高,统计学差异显著;而K562细胞的M-CSF-cnR与PBMC诱导表达的M-CSF-cnR水平无统计学差异;用细胞分级分离技术从HL-60细胞中提取细胞核和细胞质蛋白,经SDS-PAGE和蛋白免疫印迹分析表明:HL-60细胞的胞质和胞核中有相对分子质量为14000、16000和20000三种M-CSF异型体;HL-60细胞的胞质和胞核中只有一种相对分子质量为120000的M-CSF-R;提示:白血病细胞M-CSF表达呈异质性和多样性。 为进一步分析细胞内M-CSF和M-CSF-R分子的存在状态及其相互作用,用抗M-CSF-R多克隆抗体(IgG)分别沉淀HL-60细胞的胞质和胞核中的M-CSF-R,经protein A-Sepharose CL-4B处理和SDS-PAGE电泳后,用抗M-CSF的单克隆抗体(IgM)和抗IgM二抗作为检测抗体,进行蛋白免疫印迹,结果
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