【摘 要】
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该文中以出血性大肠杆菌O157:H7为研究材料,以基因5和3端序列设计一对引物,经聚合酶链式反应特异性扩增了编码SLT-Ⅰ毒素基因DNA片段,扩增片段长度为1245bp,将扩增的DNA片段
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该文中以出血性大肠杆菌O157:H7为研究材料,以基因5和3端序列设计一对引物,经聚合酶链式反应特异性扩增了编码SLT-Ⅰ毒素基因DNA片段,扩增片段长度为1245bp,将扩增的DNA片段与T-载体pUCm-T连接后转化大肠杆菌,经菌落PCR筛选、限制性内切酶酶切和Southern印迹杂交分析后获得阳性克隆pUCm-T-SLTⅠ,双脱氧末端终止法测定了重组质粒插入片段的核苷酸序列,其中SLTⅠA亚基基因编码区长879bp,编码293个氨基酸的多肽;SLTⅠB亚基基因编码区为207 bp,编码69个氨基酸的多肽.该基因与一报道SLT-Ⅰ基因同源性高达99﹪,是包含有SD序列、起始密码子、SLTⅠ编码基因、终止密码子的完整读框.将其克隆到表达载体pQE30中,经筛选得到的阳性重组质粒可以在M15中被诱导表达.通过作动物实验,证实了该重组质粒能正确地表达有生物学活性的SLT-Ⅰ毒素蛋白,从而为制作预防出血性大肠杆菌O157:H7感染的SLT-Ⅰ基因工程疫苗奠定了技术基础.
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