目的:近年来,基因治疗的发展非常迅速。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是基因治疗中最重要的发现之一,在治疗肿瘤和病毒感染方面具有很大的使用潜力,得到了人们的广泛关注。但是RNAi本身的一些理化性质限制了小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的应用,稳定性较差,易被生物体内的核酸酶降解,降低了siRNA的应用效率;并且siRNA分子量较大,具有亲水性和负电性,这些都影响了siRNA的跨膜转运效果。因此,如何能够将siRNA成功地转运至细胞质中并发挥治疗效果成为人们研究的热点。在siRNA的应用研究中,一个重要的目的就是能够使siRNA成功穿透细胞膜,进入到细胞质中发挥疗效。因此,细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)引起了人们的关注。细胞穿膜肽是由5-30个氨基酸按照一定的顺序组成的两性或阳性的短肽链。它能够高效地穿过细胞膜,且能够介导其它生物大分子(比如siRNA)进入细胞质中,是目前研究较热的药物载体。本研究选用了具有类似穿膜肽性质的八聚组氨酸(H8),它是由8个组氨酸分子反应生成的一种阳性短肽,为了提高H8的穿膜效率,将H8与疏水基团(硬脂酸,SA)反应,合成SA-H8和SA-H8-PEG2000两种阳性载体,将合成的载体通过静电作用与siRNA结合,组成SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA纳米复合物。通过测定纳米复合物的电位、粒径、凝胶阻滞能力考察SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA的理化性质,筛选出了SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA的最佳处方配比。以MCF-7细胞和A549细胞为模型,考察载体与细胞之间的相互作用,评价细胞对载体药物的摄取效率。方法:通过查阅文献和试验探索,确定了SA-H8和SA-H8-PEG2000两种阳性载体材料的合成和纯化方法。将sa和h8在室温条件下搅拌反应1h,用纯净水进行透析纯化,直接冻干备用,即得目的产物sa-h8。将sa-h8与mpeg2000-mal溶液混合,避光反应48h,用纯净水透析纯化,即得产物sa-h8-peg2000。以制剂的粒径、电位和琼脂糖凝胶电泳行为为指标,考察制剂的理化性质,筛选出最佳处方配比。选择mcf-7细胞和a549细胞为细胞模型,以流式细胞分析的方法测定细胞的荧光强度,通过荧光强度的强弱来判定细胞的摄取效率,以评价载体对sirna的转染效率的贡献。结果:将合成的产物进行质谱分析,结果显示合成得到sa-h8和sa-h8-peg2000两种共轭物。以sirna作为模型效应分子,通过室温涡旋孵育的方法得到sa-h8-peg200020%/sirna、sa-h8-peg200050%/sirna和sa-h8-peg2000/sirna纳米复合物。通过测定电位、粒径以及凝胶阻滞试验得到了纳米复合物的理化性质。sa-h8-peg200020%/sirna处方粒径在200nm-700nm之间,且随着n/p比的增加而变大。从琼脂糖凝胶电泳的结果可以分析得到,当n/p比为80时,仍然能够看到清晰的条带,说明sirna未被完全包载,sa-h8-peg200020%对sirna的包载能力较差。sa-h8-peg2000的比例提高至50%之后,sa-h8-peg200050%/sirna处方粒径在350nm-450nm之间。n/p比为80时,sirna被完全包载。sa-h8-peg2000/sirna处方粒径在300nm-400nm之间,且粒度分布相对均匀,当n/p比大于或等于40时,实现sirna的完全包载。综上所述,选择sa-h8-peg200050%/sirna80:1和sa-h8-peg2000/sirna80:1作为最终处方。由流式细胞分析的结果可知:在a549与mcf-7细胞中,sa-h8-peg200050%/sirna和sa-h8-peg2000/sirna的细胞摄取率都随着时间的推移而增大,呈现明显的时间依赖性。sa-h8-peg200050%/sirna和sa-h8-peg2000/sirna两种载体形式的细胞摄取率明显高于游离sirna,但与市售制剂仍存在一定差距。结论:本研究所构建的载体可以有效包载siRNA并显著提高其细胞摄取水平。然而,为达到市售制剂的转染能力,仍有必要对载体的处方、制备工艺进一步优化和筛选。