携带Trail基因的溶瘤痘苗病毒对肺癌的抗癌效果

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liangpask
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肺癌在全世界范围内一直拥有着高发生率和高死亡率,而且因为它具有很难治愈的特点,使得它已经成为威胁人类健康的第一杀手。针对肺癌患者的治愈是癌症目前治疗的一个难题。目前在医学上作主要治疗手段的传统外科手术虽然有很多优点但又存在很明显的不容忽视的局限性,外科手术无法从本质上对肺癌患者进行充分治疗而且在一度程度上是无法延长患者的生存时间的。  中国科学院刘新垣院士提出的癌症靶向基因-病毒治疗策略(CTGVT)的意义就在于利用基因的特异性表达的抗癌因子以及利用病毒的复制能力以及携带外源基因的作用,在整个治疗方向利用了病毒的复制携带抗癌基因的表达蛋白的作用,双管齐下对癌症的治疗有着事半功倍的效果。  美国加利福尼亚大学心血管研究所一个课题组在“cancer research”上发表了一篇名为“Amplification of oncolytic vaccinia virus widespread tumor cell killing by sunitinib through multiple mechanisms”的文章,文章中通过了大量的动物实验验证了痘苗病毒的静脉注射的优势以及其中的作用机理,文章通过免疫荧光的微球实验验证了痘苗病毒能增加血管的通透性以及破坏肿瘤组织里的血管使得痘苗病毒能进入肿瘤组织进行杀伤和抑制癌细胞的增殖。之前有文献报道痘苗病毒在病毒复制时的安全性,携带外源基因的能力,以及在外源基因的承载位点以及对外源基因复制的稳定性的特点使得痘苗病毒成为可应用于CTGVT的一种理想的治疗载体。而TNF相关的凋亡诱导配体是一种被证实的能与存在于癌细胞膜表面的包含有完整死亡结构域的死亡受体相结合,将凋亡信号传递到细胞核,促进凋亡的膜蛋白。正常组织中的细胞其实本身也存在凋亡受体,但由于缺乏完整的死亡结构域,因此并不能促进细胞凋亡。  因此,我构建了在病毒的TK区携带trail基因重组溶瘤痘苗病毒。通过PCR鉴定相应的启动子,野毒序列,相应基因完毕后扩增,小量扩增,离心细胞碎片,测定滴度,进行细胞水平实验。大量扩增细胞破碎沉降病毒后蔗糖密度梯度离心纯化,测定滴度,进行后续的细胞水平以及动物水平的实验。  通过Western blot分析去检测各种不同癌细胞膜表面的拥有完整的死亡结构域的死亡受体的含量,去验证是否膜表面死亡受体的含量是否与TRAIL蛋白对不同癌细胞的促凋亡能力有关。由Western blot分析得出结论,在肺癌的细胞系的死亡受体的含量普遍比其他肿瘤细胞系含量高,也许意味着在肺癌细胞系中将会有更好的促凋亡能力,因此我们选用肺癌细胞系进行一系列的探究实验,在后面的肺癌的细胞水平和动物水平分别得到了进行验证。  我们最后通过皮下给药以及全身给药进行对构建的单基因的溶瘤痘苗病毒进行肿瘤细胞杀伤实验,通过TUNEL染色发现对癌组织中细胞的凋亡能力有很强的诱导性。这是针对肺癌的靶向基因病毒的治疗的又一个成功的尝试。
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学位
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