HOTAIR与自噬相关蛋白LC3、p62在退变椎间盘中的表达及相关性研究

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第一部分HOTAIR与LC3、p62在人髓核组织中的表达情况目的分析椎间盘髓核组织中HOTAIR与自噬标志物LC3、p62的表达情况,及其与椎间盘退变等级的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测30例(其中PfirrmannⅡ、III、IV、V级的椎间盘标本分别为6、6、8、10例)髓核组织中HOTAIR及LC3-I、LC3-II、p62的表达水平。分别分析HOTAIR、LC3-II/I、p62与椎间盘退变等级的相关性。结果qRT-PCR检测显示,随着椎间盘退变等级的增加,HOTAIR的表达逐渐减低,且与椎间盘退变等级呈负相关(r=-0.67,P<0.05);随着椎间盘退变等级的增加,LC3-II/I的比值也逐渐降低,且与椎间盘退变等级呈负相关(r=-0.79,P<0.05),而p62的表达逐渐增高,且与椎间盘退变等级呈正相关(r=0.46,P<0.05)。小结人椎间盘的退变等级与HOTAIR的表达和LC3-II/I比值呈负相关,与p62的表达呈正相关。第二部分探讨人正常髓核细胞中HOTAIR影响LC3、p62的表达情况目的在人正常髓核细胞中探讨HOTAIR与LC3-II/I比值和p62的表达是否相关。方法应用脂质体转染法处理人正常髓核细胞,构建si-NC组、si-HOTAIR组、Vector-NC组以及Vector-HOTAIR组。通过实时荧光定量PCR与WB技术检测各组髓核细胞中LC3-I、LC3-II、p62的表达情况。分析抑制与过表达HOTAIR后LC3-II/I比值和p62的表达变化。结果q RT-PCR及WB检测显示抑制HOTAIR基因后LC3-II/I比值较对照组明显降低(P<0.01),而p62的表达较对照组明显升高(P<0.01)。过表达HOTAIR基因后,LC3-II/I比值较对照组明显增高(P<0.01),p62的表达则较对照组明显降低(P<0.01)。小结HOTAIR可通过上调LC3-Ⅱ/Ⅰ比值表达与下调p62的表达来影响人髓核细胞自噬。
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