研究背景足细胞作为终末分化的细胞,是肾小球滤过屏障的重要组成部分,对于维持正常的肾小球滤过功能至关重要。足细胞内脂质异常聚集可引起细胞脂质毒性、损伤和凋亡,在慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)的进展中发挥重要的作用。黄连素(Berberine,BBR)作为一种从药用植物(如黄连)中提取的异喹啉生物碱,是临床治疗肠道感染性疾病的常用药物。近年来发现黄连素还可降血脂和延缓CKD的进展。然而黄连素是否可以减轻高脂诱导的足细胞损伤有待于进一步研究。目的本文拟研究黄连素对棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导的足细胞凋亡的影响,并进一步阐明其机制是否与其减轻足细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)诱导的内质网应激有关,为黄连素在防治脂质肾毒性提供基础证据。方法分别用PA、内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid,4-PBA)、BBR及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)作用于小鼠永生性足细胞,用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit 8)检测足细胞死亡率,流式细胞学计数检测足细胞凋亡,Western印迹检测内质网应激相关蛋白包括BIP、PERK、ATF4、CHOP、ATF6、IRE1α及Cleaved-caspase12和凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3的表达情况。细胞免疫荧光技术检测BIP的荧光强度变化。用DCFH-DA染色检测细胞内的ROS水平。结果(1)与对照组相比,PA可引起肾小球足细胞死亡率增加,凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3的表达增加,黄连素可以减轻PA诱导的足细胞凋亡。(2)PA可呈浓度依赖性引起足细胞内质网应激相关蛋白BIP、PERK、ATF4、CHOP、ATF6和IRE1α的表达增加。同时,PA可引起足细胞内BIP免疫荧光颗粒的大量堆积。(3)内质网应激抑制剂4-PBA可减少PA诱导的足细胞凋亡,降低Cleaved-caspase3及内质网应激相关蛋白BIP、PERK、ATF4、CHOP、ATF6、IRE1α、Cleaved-caspase12的表达,同时,可减弱PA诱导的足细胞内BIP的荧光强度。(4)PA可呈浓度依赖性地增加足细胞内的ROS水平,抗氧化剂NAC可减少足细胞内ROS的产生。同时,NAC可减轻PA诱导的足细胞凋亡,减少Cleaved-caspase3及内质网应激相关蛋白BIP、PERK、ATF4、CHOP、ATF6、IRE1α、Cleaved-caspase12的表达.(5)黄连素可减少PA诱导的内质网应激相关蛋白BIP、PERK、ATF4、CHOP、ATF6、IRE1α及Cleaved-caspase12的表达及足细胞内ROS的产生。同时,黄连素可减弱PA诱导的BIP荧光强度。结论(1)PA可诱导足细胞凋亡,其机制可能与PA诱导的细胞内质网应激及ROS增加相关。(2)黄连素可以通过抑制ROS-内质网应激途径减轻PA诱导的足细胞凋亡。