糖类化合物是生命体中最重要的三类生物分子之一,在天然产物中有着广泛的分布,包括单糖、寡糖、多糖、糖苷类化合物等多种形式,具有结构丰富、组成复杂、生物活性多样的特点。本课题围绕“天然来源糖类化合物的分离分析”开展研究,基于亲水作用色谱方法和新型分离材料,对糖类化合物的前处理、分离纯化和结构表征等方面进行了具体研究。1.采用三种单糖和七种二糖为模型化合物,发展了系统策略用于快速评价7种不同类型HILIC固定相的色谱性能,具体包括硅胶类、酰胺类、糖基类、二醇基类和两性离子类等固定相。在使用HILIC方法分离糖类化合物过程中,柱温、选择性和表面电荷性质扮演着重要角色。对于使用HILIC方法分离糖类化合物,评价结果将会在优化实验参数如色谱柱选择、流动相调节及柱温控制方面更加有效。2.发展了基于HILIC模式的系统策略,包括HILIC-SPE、HILIC半制备方法和HILIC-ELSD检测方法,用于泽兰水提物中RFOs的分离、纯化和含量测定。通过前处理和制备获取了聚合度4-6的标准品,定量分析结果表明,泽兰地下部分可作为RFOs的一种新来源,其蔗糖和RFOs的总含量为712.7 mg/g。该方法具有通用性、稳定性和有效性可用于寡糖标准品的制备和非消化性寡糖的质量评价。3.借鉴蛋白质组学“自下而上”法,采用部分酸水解-HILIC-MS/MS方法完成黄芪寡糖的水解、分离和结构检测。经优化,在水解时间4 h,水解温度80℃,三氟乙酸浓度1.5 mol/L的条件下,黄芪多糖可以稳定的水解为特征的寡糖片断。经液质联用分析,黄芪多糖为1-4连接葡聚糖,水解后,得到DP 4-11的葡寡糖。该研究结果对其他中药多糖的表征具有一定的示范作用。4.以甜叶菊中的糖苷类化合物为研究对象,采用固相萃取方法对微量皂苷进行了富集,然后建立了糖苷类化合物的二维RPLC/HILIC高效液相色谱分离方法,该方法对皂苷的分离具有很好的正交性。将该方法放大到制备级别,对甜叶菊中的糖苷类化合物进行了纯化分离,研究结果有助于甜叶菊产品的成分分析和质量控制。5.设计合成新型的糖苷类化合物修饰硅胶固定相,基于"thiol-ene"点击化学策略,实现了甜菊苷类化合物莱胞迪苷A(RA)在硅胶表面的固载。固定相Click TE-RA具有足够的亲水性和独特的选择性,实现了各种极性化合物的保留和分离。同时,在HILIC/RPLC混合模式下,皂苷类化合物在Click TE-RA固定相上呈现出正交性的保留行为。通过改变流动相的组成,可以实现具有不同选择性的分离模式之间的相互转换。