重组蛋白tMDC-Ⅲ、SP-10、AEG的免疫原性及其生殖作用

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:loughtjiang
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受精是配子间相互作用最后融合成合子的过程,是由配子各自表面蛋白分子互补介导的,特别是存在于精子顶体的蛋白,但从精子中提取量少,用分子生物学手段大量克隆表达所需蛋白为受精机理的研究提供了方便。本文用英国葛兰素公司重组构建表达的三种抗原蛋白SP-IO,AEG,tMDC-Ⅲ免疫大鼠,通过ELISA实验、免疫荧光组化实验、交配实验对它们的免疫原性、在体内的生殖作用、精子表达部位进行了分析,结果如下: 1.三种克隆表达的精子蛋白tMDC-Ⅲ、SP-10和AEG免疫动物可成功产生抗体,并符合抗体产生的一般规律。ELISA试验和免疫荧光组化试验证明这三种重组蛋白较好地保持了天然蛋白形式的免疫原性,可用于体内外实验进一步研究它们的具体作用 2.通过免疫大鼠交配实验研究精子蛋白tMDC-Ⅲ、SP-10和AEG在体内的生殖作用,发现对照组、tMDC-Ⅲ、SP-10和AEG免疫组大鼠受精率分别为91.6%,83.3%,75.0%and 58.3%,AEG免疫组大鼠受精率显著降低。首次表明tMDC-Ⅲ免疫大鼠虽然产生高滴度抗体,但受精率只有微弱下降。 3.通过检查免疫大鼠睾丸、附睾、卵巢、输卵管的组织形态,未见任何异常,说明三种抗原免疫动物不是通过抑制精子发育和损伤生殖道而降低受精率的,同时说明了它们对机体的安全性,可作为免疫疫苗开发的侯选者。 4.利用间接免疫荧光法对AEG、SP-10、tMDC-Ⅲ蛋白在人、小鼠、兔子、猪、牛精子上进行了精确定位,AEG、SP-10在顶体部均有表达,确证了它们与精卵融合有关:首次对tMDC-Ⅲ蛋白在人、小鼠、兔子、猪、牛精子进行了精确定位,它主要存在于人精子尾部主段,小鼠和牛精子顶体,猪精子顶体和颈部,兔精子头部、颈部和尾部的主段及尾段。除人外,其它几种动物精子顶体均有tMDC-Ⅲ抗原的存在,暗示小鼠、兔、猪和牛的tMDC-Ⅲ可能在精卵融合中起作用。
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