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在哺乳动物听觉系统中,老化、耳毒性药物、感染、过度声刺激及自身免疫性疾病等多种原因可引发耳蜗毛细胞不可逆的损伤,从而导致永久性的感音性聋。耳蜗毛细胞的缺失是引起听觉损伤的一个主要原因,感音性聋影响了全世界上百万人。尽管在鸟类及低等脊椎动物中,毛细胞损伤后可以发生自发替代反应,但在成熟哺乳动物耳蜗尚未能实现毛细胞的再生及功能的恢复。 已经有研究表明新生的哺乳动物耳蜗中存在前体细胞,并且大上皮嵴(greater epithelial ridge,GER)和小上皮嵴(lesser epithelial ridge,LER)细胞很可能就是耳蜗毛细胞的前体细胞。同时,最近关于LER细胞的分离与体外培养工作已经相继开展,但迄今为止,从某一限定的耳蜗区域分离出纯GER细胞以及体外培养方面的研究尚无报道。故本研究第一部分提供了一种酶消化和机械分离相结合的新方法,成功地从新生大鼠耳蜗中分离出纯GER细胞,并进行了体外培养及生物学特性的相关探讨。分离出的GER细胞表达Islet1和Islet2(GER/LER特异性标记物)、Phalloidin(标记上皮细胞肌动蛋白)和ZO1(标记上皮细胞间紧密连接)、BrdU(标记分裂中细胞)及Hes1基因,而不表达myosin Ⅶa(标记成熟毛细胞)及Calretinin(标记不成熟毛细胞)。纯GER细胞在10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养基中呈片状贴壁生长,形似岛状,细胞表现为典型的上皮样多角形外观,具有明显的增殖能力,易形成上皮细胞所特有的“dome”结构,可以实现原代培养10天左右,传代培养2～3代,存活时间不超过4周,扫描电镜(scanning electronmicroscope,SEM)显示GER细胞培养物呈单层扁平上皮状,细胞间连接紧密,细胞表面可见微绒毛和中心体,未见毛细胞的特异性纤毛束结构;在无血清培养条件下,纯GER细胞易形成具有明显增殖能力的悬浮细胞球,细胞亦呈现典型的上皮样多角形外观,细胞球具有一定表面张力,细胞间连接紧