长白山是中国东北第一高峰,称之为“东北屋脊”,地理位于中国吉林省和朝鲜之间,长白山生态系统比较完整,自然环境复杂多样,山上气候变化无常,植物种类丰富多彩,所以被人们称之为“自然博物馆”及巨大的“生物基因库”。本研究从长白山不同海拔湿地中采集土壤样品,直接提取土壤总DNA,然后PCR扩增,利用DGGE技术分析微生物的群落结构及微生物的多样性。1.对16S rDNA V3可变区域的PCR反应体系和反应条件进行优化。主要从Taq聚合酶的用量、dNTPmixture的用量、引物的选择和引物的用量等4个方面进行筛选。最后得出最适宜的PCR扩增体系为:0.25 μLTaq聚合酶(5 U/μL)、2.5 μL 1O×PCR Buffer(Mg2+)、2 μL dNTP mixture、5 μL模板DNA引物(GC-338F,518R)各1 μL,加无菌ddH20补足至25μL,PCR循环程序为:94℃预变性9min;94℃(变性303s,55℃退火30s,22℃(延伸30 s,30个循环;72℃C延伸7 min。2.对PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)中的各项条件参数进行优化结果,在1×TAE缓冲液中电泳14个小时,电压是100V,电泳温度是60℃C,变性梯度范围是40%～60%,然后在溴化乙锭染色液中染色。最后,在成像系统中观察与照相。3.利用PCR-DGGE对长白山11个不同海拔湿地土壤样品进行了分析,结果回收测序了 19个清晰的条带,其中16个条带是不可培养微生物。测序结果,条带2、条带7、条带8、条带9、条带19等5个条带均属于酸杆菌属(Acidobacteria bacterium),相似度为91%～98%。