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炭疽芽胞杆菌(Bacillusanthracis)简称炭疽杆菌,是能形成芽胞的革兰氏阳性粗大杆菌。它可感染动物和人引起皮肤炭疽、肺炭疽和肠炭疽等。炭疽病是五大人畜共患病之一,对畜牧业及人类健康的危害很大。此外,炭疽杆菌还被用作首要的生物战剂和制造生物恐怖,对社会稳定造成很大威胁。因此炭疽杆菌对人类社会的影响是极其巨大的,这使得与之相关的研究一直是生命科学领域的热点之一。
迄今为止,炭疽杆菌毒力基因和致病性的关系还不明晰。因此,探求已知毒力因子作用的分子机制,寻找新的毒力基因成为炭疽杆菌研究的热点。本研究采用同源重组技术构建slp基因缺失突变株,对突变株进行了生理生化特征研究。结果表明:突变株与野生株差别不明显,两者生化反应差异不明显。并且确定了炭疽杆菌的电转化条件:电击杯,0.1cm;电压,0.6kv;电阻,500Ω;电容,25μF。确定了突变株同源重组筛选方法,获得了A16R△slp::spc缺失突变株。
评价slp基因的功能,还需通过细胞、动物实验模型进行功能验证。本研究采用细胞侵袭实验和小鼠腹腔注射实验等毒力评价模型,评价了slp基因对炭疽杆菌毒力的影响。结果表明:体外细胞实验中,即等量突变株和野生株芽胞分别与CHO细胞相互作用后,突变体毒力显著弱于野生株。小鼠腹腔注射实验亦说明,突变体繁殖体毒力弱于野生株。
采用凝胶双向电泳,建立了对数期和稳定期的野生株和假想S-层蛋白SLP突变株的双向电泳图谱,比较后鉴定到54个差异点,并对差异点进行了胶内酶切和质谱鉴定,得到28个有意义的蛋白点。结果表明:野生株和slp基因缺失突变株在不同生长时期的双向电泳呈现了较明显差异,代谢相关蛋白发生了相应变化。在slp基因缺失后,SLP突变体中的S-层蛋白(EAl)表达上调。
综上所述:slp基因对炭疽杆菌的代谢影响不大,其缺失会使炭疽杆菌毒力显著下降。