厉眼蕈蚊(Lycoriella sp.)是危害食用菌的一种双翅目害虫,它以幼虫取食食用菌,对食用菌产量造成严重的影响。本研究采用山药作为眼蕈蚊的饲料,通过控制温度和湿度的变化,选出最佳饲养条件,即在湿度为80%,温度25℃的条件下,幼虫的存活率和存活历期均最长,短期内建立种群,在试验室进行蕈蚊的大量饲养。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)LLP29是一株高效杀蚊菌株。经前期试验,发现浓度较高的LLP29菌株发酵液能较好地控制眼蕈蚊的幼虫。Bt LLP29菌株Cry4B具有较高的杀虫毒性。本研究根据cry4B基因序列设计的特异性引物,成功克隆了LLP29特有的cry4B基因,并对其进行了生物信息学分析,发现cry4B基因和已报道的cry4B之间的同源性高达99%,同时还揭示出了cry4B基因及其编码蛋白的一些生物和理化性质,表明该蛋白不含信号肽,无跨膜区域。通过氨基酸分值高低,得出该蛋白为亲水性蛋白。结构域预测表明Cry4B由Endotoxin_N、Endotoxin_M和Endotoxin_C3个结构域组成。它其与其他Bt cry同源基因的相似性差异较大。与Cry4Ba的相似性最高为99%。通过原核表达获得Cry4B杀蚊蛋白,以眼蕈蚊为靶标进行生物测定, 其LCso达1160ng/mL。运用生物素-亲和素沉降试验,成功分离到两个Cry4Ba结合蛋白。但可能是结合蛋白浓度偏低,质谱检测,未能获得有效数据。本研究利用Cry4B毒素蛋白,通过Pulls down试验,寻找蕈蚊的受体,不但可以极大的丰富Bt杀蚊的理论价值,也可为食用菌有害蚊虫的生物防治提供重要基础。