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本研究通过rBovIFN-γ的原核表达及其真核表达质粒的构建,以期研制rBovIFN-γ及其McAb,为进一步研究rBovIFN-γ及其McAb在牛病诊断、防制、治疗及其相关研究中的应用奠定基础。1.rBovIFN-γ在大肠杆菌中的表达及其产物的鉴定
根据BovIFN-γ基因的已知序列,通过RT-PCR扩增出BovIFN-γ前体(PreBovIFN-γ)的cDNA序列(包含信号肽序列),然后将其定向克隆入pVAX1质粒中,构建重组质粒pVAX1-PreBovIFN-γ。
通过PCR从重组质粒中扩增出成熟BovIFN-γ的DNA序列,并将后者定向插入原核表达质粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1,经DNA测序确认后,分别转化E.coliBL21和E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,各自表达出大小在22KD和42KD左右的融合蛋白。本研究为进一步研究rBovIFN-γ单抗在研究牛免疫细胞功能、牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础。