【摘 要】
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钾是植物必不可缺的大量元素,作为细胞内的主要溶质,参与植物的生长发育过程。植物中存在低亲和性和高亲和性两种钾吸收系统。钾转运体是高亲和性钾吸收系统的重要组成部分,在植
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钾是植物必不可缺的大量元素,作为细胞内的主要溶质,参与植物的生长发育过程。植物中存在低亲和性和高亲和性两种钾吸收系统。钾转运体是高亲和性钾吸收系统的重要组成部分,在植物K+的跨膜运输中起重要作用。钾转运体包括4个家族,KUP/HAK/KT、HKT/Trk、CHX和KEA,其中,KUP/HAK/KT家族成员最多,且研究最为深入。其成员是广泛存在于植物细胞质膜和液泡膜上的一种跨膜蛋白,多具有高亲和性钾吸收功能的转运体。KUP/HAK/KT转运体不仅在植物对K+的跨膜运输中起重要作用,也参与调节植物的生长发育。本研究采用生物信息学方法分析林烟草(Nicotiana sylvestris)和绒毛状烟草(N. tomentosiformis)KUP/HAK/KT家族成员,构建系统进化树,并根据所获结果,从林烟草中获得一个KUP/HAK/KT家族基因NsHAK11,并对其核苷酸序列、氨基酸序列、与启动子序列进行了分析,同时,对NsHAK11基因的表达特性进行了研究,进而预测其可能具有的生理功能。具体内容有以下四个方面:(1)本研究应用生物信息学方法,搜索林烟草和绒毛状烟草基因组数据库,预测到两种烟草KUP/HAK/KT钾转运体家族成员均含有19个成员,编码长度在1326—3669bp之间,跨膜区数量在7—14个之间。对所有成员构建基因进化树,发现进化上分为4个Cluster(簇)。(2)利用生物信息学方法所获结果,从林烟草中分离一个KUP/HAK/KT家族基因,该基因cDNA序列全长2391bp,可编码一个由796个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白与拟南芥(Arabidopsisthaliana)中AtKUP11的相似性最高,因此,将其命名为NsHAK11,其编码蛋白与早期获得的两个烟草NrHAK1和NtHAK1的相似性仅为48%和49%,所以NsHAK11是一个新的烟草KUP/HAK/KT家族基因。(3)应用Wolf PSORT、Softberry-ProtComp9.0和CELLO v.2.5网站预测显示NsHAK11主要定位于细胞膜中。通过亚细胞定位实验对预测结果进行验证,NsHAK11与GFP和DsRed2两种报告蛋白融合的定位结果均发现NsHAK11可能定位于细胞质膜中,与预测结果相符。(4)利用PLACE网站对NsHAK11启动子分析得到,NsHAK11可在根、花和胚芽组织中表达,受到低温、高温、干旱和激素因素的影响。利用荧光定量RT-PCR技术,对NsHAK11的组织表达、低温、NaCl、高温和低钾胁迫下的表达情况进行了分析。发现NsHAK11在盛花期林烟草各组织器官中均有表达,其在主根中的表达量最高,在侧根中的表达量次之,而在叶片中的表达量最低。低温处理时NsHAK11表达量上调程度最大且响应时间最早,高温处理时其表达量上调程度次之,但在前期会出现明显抑制,而在高盐和低钾处理时其表达量均可上调表达,但在盐胁迫下NsHAK11的表达变化更为显著。
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