促黄体素释放激素单克隆抗体的研制及去势疫苗相关动物实验

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去势疫苗能刺激机体产生LHRH抗体,中和内源性LHRH,达到温和去势的目的。为了建立一种定量检测其抗原成分的方法并对其是否可逆进行验证,进行了本实验。应用Trx-LHRH融合蛋白与鼠源Trx抗体制备的复合物免疫BALB/C小鼠,当LHRH抗体达到1:10~4。取脾细胞与SP2/0用PEG-1500融合,采用间接ELISA和抑制ELISA筛选阳性克隆,多次有限稀释得到D4B7、B3E6两株单抗,制备腹水。用兔源Trx抗体和LHRH单抗建立双抗体夹心ELISA,定量检测去势疫苗抗原成分。 RT-PCR方法从SD大鼠下丘脑扩增LHRH基因,以β-Action作为检测LHRH mRNA稳定性的参照,比较不同发育阶段LHRH表达量的差异,发现出生后1-2日龄有LHRH基因表达,至青春期又重新启动LHRH表达,这一结果对于研究LHRH在发育期的调控提供了一定基础。 以去势疫苗免疫的性成熟前小鼠(断奶前、断奶后)和性成熟小鼠为动物模型,对性行为、受孕情况、睾丸肉眼及组织学变化、精子数量及活动能力、睾酮水平在免疫期和恢复期与正常组对比,发现去势疫苗免疫一段时间后,小鼠性功能可以恢复。 应用明矾、氢氧化铝、弗氏佐剂制备的去势疫苗免疫大鼠,检测大鼠LHRH抗体效价、睾酮水平,剖检睾丸、前列腺的肉眼及组织学变化,以及精子数量、畸形率的变化,确定去势疫苗的效果。结果表明明矾、弗氏、氢氧化铝佐剂组均能够较好的诱导大鼠产生LHRH抗体,引起睾酮明显降低。三个免疫组与阴性对照组相比,都能使大鼠明显增重,并起到萎缩性腺的作用
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