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目的:探讨硫化氢(H2S)抑制大鼠腹膜纤维化腹膜间皮细胞EMT的分子机制。方法:1.体内实验:20只SD大鼠(雄性)随机分成4组:(1)对照组:生理盐水20 m L/d腹腔注射;(2)H2S组:Na HS 1μmol/kg*d加入生理盐水中腹腔注射;(3)建模组:4.25%高糖腹膜透析液20m L/d腹腔注射,第1,3,5,7天加入脂多糖(LPS)0.6mg/kg腹腔注射;(4)H2S治疗组:4.25%高糖腹膜透析液20m L/d腹腔注射,第1,3,5,7天加入脂多糖(LPS)0.6mg/kg腹腔注射+Na HS 1μmol/kg*d腹腔注射。28天后取壁层腹膜组织行Masson染色观察腹膜和胶原纤维厚度。2.体外实验:无菌条件下获取大鼠腹膜,消化处理后获得大鼠原代腹膜细胞,体外培养。待细胞生长2-3代时,将同步化后的大鼠原代腹膜间皮细胞随机分为6组:(1)对照组:无处理;(2)建模组:4.25%葡萄糖腹膜透析液:15%FBS完全培养液(V:V)=1:1;(3)50μmol/L H2S治疗组:4.25%葡萄糖腹膜透析液:15%FBS完全培养液(V:V)=1:1+50μmol/L Na HS;(4)100μmol/L H2S治疗组:4.25%葡萄糖腹膜透析液:15%FBS完全培养液(V:V)=1:1+100μmol/L Na HS;(5)300μmol/L H2S治疗组:4.25%高糖腹膜透析液:15%FBS完全培养液(V:V)=1:1+300μmol/L Na HS;(6)H2S组:无处理细胞+300μmol/L Na HS。其中Na HS提前预处理30min。通过RT-PCR检测细胞内IL-6和MCP-1的表达,Western Blot法检测细胞纤维化相关蛋白及TGF-β1信号通路中Smad3、Smad2/3及磷酸化蛋白的表达水平。结果:1.体内实验:Masson染色示:与对照组比较,建模组大鼠腹膜间皮细胞下胶原纤维沉积量明显增加,致密层明显增厚,腹膜厚度显著增加(P<0.001),给予H2S治疗后,胶原纤维沉积量、腹膜厚度等明显降低(P<0.01)。2.体外实验:与对照组比较,建模组腹膜间皮细胞炎症因子IL-6和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达明显增加,紧密连接蛋白ZO-1和细胞角蛋白(cytokeratin)表达显著降低,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、纤维黏连蛋白(FN)及磷酸化Smad3和Smad2/3蛋白表达显著增加;予Na HS干预后,与建模组比较,上述炎症因子表达明显减少,ZO-1和cytokeratin蛋白表达增加,α-SMA、PAI-1、FN及磷酸化Smad3和Smad2/3蛋白表达显著降低,差异有统计学意义。结论:1.外源性H2S可抑制高糖腹膜透析液与LPS所致的慢性腹膜炎大鼠腹膜纤维化。2.H2S可以通过影响腹膜间皮细胞EMT改善腹膜纤维化。3.H2S的抗EMT机制与其调控TGF-β1-Smad信号通路及抑制炎症有关。综上所述,H2S能够抑制大鼠腹膜间皮细胞EMT过程从而改善腹膜纤维化。H2S的抗腹膜间皮细胞EMT机制与其调控TGF-β1-Smad信号通路及抑制炎症有关。