先天性心脏病(先心病)已成为人类死亡率最高的出生缺陷之一,严重威胁人类身心健康。其中除8-10%为家族遗传性先心病外,其余为散发先心病。遗传和环境因素相互作用是先心病发生的重要原因,其中环境因素主要包括宫内感染、药物、环境污染等。流感病毒作为宫内感染的重要因素之一,近年来备受关注。流行病学研究报道流感病毒感染可显著增高心脏发育畸形发生的风险,尽管近年来先心病发病机制的研究取得了较大进展,但国内外对流感病毒等环境因子是如何导致先心病发生的调控机制尚不明确。已有研究报道H1N1片段蛋白能与宿主多种功能蛋白产生生理上的相互作用,进而影响宿主及病毒自身蛋白在转录、转录后加工及蛋白翻译水平上的表达。为研究H1N1流感病毒与心脏发育调控基因的相互作用关系,本研究在课题组前期数字基因表达谱测序结果筛选及生物信息学分析基础上,得到了Dvl2 和Gata6两个重要候选基因,通过构建H1N1蛋白重组表达质粒,研究了 H1N1流感病毒蛋白与两个调控因子的蛋白相互作用,我们假设H1N1流感病毒有可能直接结合到它们启动子上。本文将带Flag标签的流感病毒重组表达质粒瞬时转染至H9C2细胞进行蛋白融合表达,检测病毒蛋白的表达分布,结果显示H1N1能够进入宿主细胞的细胞核;进一步利用染色质免疫共沉淀(CHIP)技术对流感病毒与筛选基因启动子互作关系展开研究,结果显示H1N1流感病毒与Dvl2和Gata6两个转录因子的启动子区域结合;然后进一步检测了流感病毒不同片段蛋白与这两个候选蛋白启动子的结合情况,分析发现Dvl2和Gata6两个转录因子的启动子在H1N1的NS1蛋白上富集。Gata6是心脏早期发育的一个关键调控蛋白,能对心肌细胞的分裂、分化及线性心管的形成进行调节,Gata6突变与多种人类心脏结构畸形有关。本实验重点探究了 NS1蛋白对Gata6不同长度启动子的转录调控作用,发现在转染48小时NS1对其上游945bp的片段的激活作用达到显著水平,但在第6天开始对其转录具有抑制作用。本研究构建了流感病毒蛋白重组表达质粒,筛选出Dvl2及Gata6两个重要心脏发育相关基因,在细胞水平探究了流感病毒与这两个基因的相互作用机制。研究结果对进一步深入研究H1N1流感病毒如何导致先心病的分子发生机制奠定了基础,为研究先心病发生与其它环境因子之间关系提供了有益的借鉴。