花椒叶黄酮的微波提取及其成分分析

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花椒(Zanthoxylum bungeanum)是芸香科花椒属植物,主要分布于我国中南、西南及陕西、甘肃、山东、河北、江苏、安徽等地,近年来自然灾害的频繁发生导致花椒产量显著下降而花椒叶却大量留存,对来源如此丰富的花椒叶进行全面的研究,提取其中可利用的活性成分,如对花椒叶黄酮提取、成分分析及其功能性进行研究,进而指导花椒叶保健食品和药品的开发,具有一定的应用价值。本课题的研究包括四个部分:(1)利用微波辅助法提取花椒叶黄酮,考察了乙醇浓度、料液比、微波功率、提取温度和时间五个因素对花椒叶黄酮得率的影响,结果表明,微波辅助法提取花椒叶黄酮的最佳条件是:温度70℃、乙醇浓度65%、料液比1:30、微波功率500W、提取时间4min,在此条件下,花椒叶黄酮的得率为7.64%。(2)通过静态吸附法比较了八种大孔吸附树脂的吸附和解吸性能,表明大孔吸附树脂D101对花椒叶黄酮的纯化效果最佳。采用动态法对样品液吸附流速、pH条件、解吸液乙醇浓度和解吸流速进行了研究,同时采用高效液相色谱法进行分析表征了分离纯化的效果。实验结果表明,大孔吸附树脂D101对花椒叶总黄酮的最佳吸附解吸条件为:样品液pH为4,吸附流速为2BV/h,解吸液60%乙醇,解吸流速2BV/h,在此条件下,经纯化后花椒叶黄酮纯度由23.2%提高到了56.4%。(3)以高效液相色谱分离、串联四级杆质谱负离子方式检测,首次使用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS/MS)对花椒叶黄酮的成分进行了定性及定量分析。根据相对分子质量、二级质谱碎片等信息鉴定出九种黄酮类及三种酚酸类成分,利用外标法及内标法对其进行定量,分别为:山奈酚-3-芸香糖苷(16.84g/g)、表儿茶素(92.74g/g)、槲皮素-3-芸香糖-7-鼠李糖苷(29.55g/g)、芹菜素-8-C-阿拉伯糖苷(40.89g/g)、牡荆素(87.28g/g)、芦丁(390.37g/g)、金丝桃苷(230.35g/g)、槲皮苷(2347.97g/g)、山奈酚-7-鼠李糖苷(270.63g/g)、奎宁酸(44.40g/g)、绿原酸(3133.67g/g)和5-阿魏酰奎宁酸(16.84g/g)。(4)以人结肠癌细胞HT-29细胞和DCFH-DA荧光探针为媒介,采用细胞模型法初步探索了花椒叶黄酮的细胞内抗氧化活性。通过化学测定法比较了了花椒叶黄酮和合成抗氧化剂Vc的总抗氧化能力和清除自由基能力。结果表明,花椒叶黄酮在1.0mg/mL的浓度范围内对HT-29无毒性且具有很好的细胞内抗氧化能力;其清除羟自由基和对卵黄蛋白脂质抗氧化能力比Vc强,总抗氧化活性、清除超氧阴离子和清除DPPH自由基的能力比Vc弱。
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