目的 通过建立肾阳虚证支气管哮喘大鼠模型。检测TARC以及诱导的相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平,证实TARC是哮喘发病的关键环节。通过分子生物学方法检测TARC下游相关细胞因子的含量,验证加味金匮肾气丸治疗支气管哮喘的疗效,完善加味金匮肾气丸治疗肾阳虚证哮喘的作用机理,探索该方调控TARC治疗哮喘的作用环节。方法1.采用模拟中医病因并结合卵蛋白致敏法建立肾阳虚证哮喘大鼠模型。2.清洁级雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、肾阳虚证哮喘模型组、加味金匮肾气丸组(中药组)、地塞米松组(西药组)。观察大鼠的一般情况;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清睾酮(T)、皮质醇(COR)、甲状腺素(T4)水平、胸腺活化调节趋化因子(TARC)、血清IgE水平;获取大鼠肺泡灌洗液测定细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平以及肺泡灌洗液进行细胞分类。取大鼠肺组织切片进行苏木精-伊红(HE)染色及免疫组化染色法检测TARC蛋白表达量,部分肺组织用RT-PCR法检测肺组织TARC-mRNA的表达。3.通过加味金匮肾气丸对肾阳虚证哮喘大鼠进行干预后,用ELISA法检测TARC以及相关细胞因子的影响,免疫组化染色法检测TARC蛋白表达和RT-PCR法检测肺组织TARC-mRNA的表达的变化,探讨加味金匮肾气丸治疗肾阳虚证哮喘的机制。结果1.成功复制肾阳虚证哮喘大鼠模型;模型组与正常组比较:①正常组大鼠肺部无炎症存在,气管、肺泡形态正常;与正常组比较,肾阳虚证哮喘组肺部存在炎症,气管壁增厚,形态异常,肺泡壁增厚。②肾阳虚哮喘模型组大鼠血清T4、COR、T值水平下降(P<0.05);③肾阳虚哮喘模型组肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13值水平均上升(P<0.05);④肾阳虚哮喘模型组血清TARC、血清IgE水平均上升;⑤肾阳虚哮喘模型组肺组织免疫组化染色TARC阳性表达增加,肺组织TARC-mRNA的表达上调。2.用不同药物干预后,各药物组对模型组比较均有不同程度的改善:①HE染色观察肺组织,肺部炎症侵润减轻,炎症细胞减少,气道粘膜水肿减轻。②中药组及西药组血清T4、COR、T值均上升(P<0.05)。③中药组及西药组肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13、值水平均下降(P<0.05)。④中药组及西药组血清TARC、血清IgE水平均下降(P<0.05)。⑤中药组及西药组肺组织TARC阳性表达下降(P<0.05),肺组织TARC-mRNA的表达有明显的下降。结论1.肾阳虚证哮喘模型大鼠血清T4、COR、T水平均呈下降趋势,提示肾阳虚哮喘模型中可能存在下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能的失衡。肾阳虚证哮喘模型血清TARC含量增加,肺组织TARC阳性表达增加,肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13值水平均上升,提示肾阳虚哮喘大鼠可能存在TARC诱导Th2分泌IL4、IL-5、IL-13增多。2.加味金匮肾气丸具有抑制炎症反应,减少白细胞和嗜酸性粒细胞的生成,修复气管黏膜和控制气道黏液分泌等作用,能从根本上改善大鼠肺部炎症环境,同时该方能改善大鼠体内激素水平,升高血清T、COR和T4水平,对下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能有一定的恢复作用。加味金匮肾气丸能通过下调TARC-mRNA的表达,降低Th2分泌IL-4、IL-5、IL-13,为临床治疗哮喘提供新的思路。