禾谷镰刀菌中琥珀酸脱氢酶FgSdhC和FgSdhD的功能研究

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禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是小麦赤霉病的优势种之一。该病菌不仅使麦类作物产量和品质降低,同时其产生的真菌毒素会严重危害人畜健康。赤霉病的防治目前主要依赖于药剂防治,SDHIs类(succinate ehydrogenase inhibitors)杀菌剂主要靶标为线粒体呼吸链复合体Ⅱ,是三羧酸循环的关键部分。为研究复合体Ⅱ中Sdh C及Sdh D亚基在禾谷镰刀菌中功能,本研究采用split-marker PCR方法,分别对禾谷镰刀菌中Fg Sdh C1、Fg Sdh C2及Fg Sdh D进行了敲除,获得抗潮霉素的转化子,经PCR鉴定,分别得到3个突变体,同时构建了回补菌株,分别对其生物型功能进行分析,结果显示:1)禾谷镰刀菌缺失基因Fg Sdh C1,在不同培养基上菌丝生长速率明显降低,分枝增多。突变体ΔFg Sdh C1培养液颜色呈淡黄色,而野生型PH-1呈玫红色。胁迫实验中发现,缺失基因Fg Sdh C1对啶酰菌胺和氟唑菌酰羟胺表现抗药性,对多菌灵、氰烯菌酯、戊唑醇、咯菌腈变敏感,对细胞壁渗透离子和金属离子SDS、Congo red、H2O2、Na Cl、Ca Cl2的敏感性增强,对Caffeine敏感性降低,不能使玉米须及麦穗致病,无性有性生殖缺陷,同时导致菌丝体SDH活性下降。Fg Sdh C2基因缺失突变体在生长发育、产孢量、致病性以及SDH等方面无显著差异。2)与野生型PH-1和回补体相比,突变体ΔFg Sdh D生长速率降低,菌落边缘菌丝致密,不产生分生孢子和子囊孢子,培养液呈淡黄色,不能侵染玉米须和麦穗。禾谷镰刀菌缺陷基因Fg Sdh D对药剂啶酰菌胺和氟唑菌酰羟胺敏感性降低,对多菌灵、氰烯菌酯、戊唑醇、咯菌腈变敏感增强,对胁迫因子SDS、Congo red、H2O2、Na Cl、Ca Cl2的敏感性增强,同时影响了菌丝体SDH的活性。以上结果表明,基因Fg Sdh C1与Fg Sdh D参与了禾谷镰刀菌生长发育、细胞壁完整性、细胞色素合成以及致病性。禾谷镰刀菌缺失基因Fg Sdh C2无显著变化。研究结果为寻找新的抑制禾谷镰刀菌的药剂作用靶标,阐明病原真菌的致病性分子机理以及研究禾谷镰刀菌对SDHIs类杀菌剂的抗性机制提供理论依据。
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