论文部分内容阅读
目的:观察电针足三里、内关穴对急性期右侧大脑中动脉脑梗死大鼠(Middle cerebral artery occlusion,MCAO 大鼠)不同时间点(术后 1D、3D、7D、14D)胃残留率的变化和胃窦组织中缝隙连接蛋白43(Connexin43,CX43)、干细胞生长因子(Stem cell factor,SCF)、酪氨酸蛋白激酶受体(Receptor tyrosine kinase,c-Kit)表达水平的动态变化,探讨电针对急性期MCAO大鼠胃动力障碍的影响。方法:将120只8周龄健康雄性SPF级SD大鼠随机分为正常对照组(A组,n=24只)、假手术组(B组,n=24只)、模型制备72只,模型制备成功后随机分为:模型组(C组,n=24只)、电针组(D组,n=24只)、药物组(E组,n=24只);将A组、B组、C组、D组、E组中24只大鼠再次随机分为术后1D、3D、7D、14D四个亚组,6只/亚组。A组不做任何处理;B组仅分离右侧颈总动脉(common carotid artery,CCA)、颈外动脉(external carotid artery,EC A)、颈内动脉(internal carotid artery,IC A),不置入线栓及不结扎血管;C组、D组、E组采用Longa改良线栓法制备MCAO大鼠模型。造模制备成功后6小时,A组、B组、C组不给予任何治疗,D组给予电针治疗(1次/天),E组给予枸橼酸莫沙必利药液灌胃(0.158g/ml,早、晚8点各一次)。各亚组分别于术后1D、3D、7D、14D四个不同时间点进行取材,采集腹主动脉血及胃窦组织,并观察各组大鼠胃体大体情况,测定各组大鼠胃残留率;采用酶联免疫吸附法(ELISE法)检测腹主动脉血清中胃动素(motilin MTL)、SCF浓度;采用HE染色法观察各组大鼠术后1D、3D、7D、14D胃窦组织的病理变化;采用RT-PCR法检测各组大鼠术后1D、3D、7D、14D胃窦组织CX43mRNA、SCF mRNA、c-KitmRNA的相对表达量;采用免疫组织化学法(immunohistochemistry IHC)检测各组大鼠术后1D、3D、7D、14D胃窦组织中CX43、SCF、c-Ki蛋白的表达水平。结果:(1)各组大鼠胃体大体观察:A组和B组各时间点大鼠胃黏膜褶皱丰富,走行一致,胃体颜色淡红,表面光滑,未见胃黏膜明显肿胀、糜烂等病变;C组与A组比较各时间点大鼠胃残留物均较多,粘膜褶皱减少,走行紊乱,胃体颜色淡白;D组、E组与C组各时间点比较大鼠胃残留物均减少,粘膜褶皱相对增多,走行相对一致,胃体颜色稍淡红。(2)各组大鼠胃窦组织HE病理观察:A组和B组在各时间点大鼠胃窦组织粘膜连续完整,结构清晰,腺体形态和结构完整,粘膜层偶可见少量淋巴细胞浸润。C组在各时间点粘膜基本连续完整,部分腺体间隙稍增宽、腺体扩张,粘膜层可见少许炎性细胞浸润。D组和E组在各时间点粘膜层连续完整,少许腺体扩张,粘膜层偶见少许炎性细胞浸润,但程度较C组轻微。(3)各组大鼠胃残留率的比较:与同时间点A组比较,C组、D组、E组在术后1D、3D、7D、14D胃残留率显著升高(P<0.05),与同时间点C组比较,D组、E组术后3D、7D胃残留率显著下降(P<0.05);C组、D组、E组内与1D时比较,术后3D、7D胃残留率逐渐升高有显著差异(P<0.05)。(4)各组大鼠血清MTL浓度的比较:与同时间点A组比较,C组、D组、E组在术后1D、3D、7D血清MTL浓度上升具有显著差异(P<0.05);与同时间点C组比较,D组、E组在术后1D、3D、7D血清MTL浓度下降具有显著差异(P<0.05);C组内与1D时比较,术后3D时血清MTL浓度上升具有显著差异(P<0.05),术后7D、14D血清MTL浓度下降具有显著差异(P<0.05);D组、E组内与1D时比较,术后7D、14D血清MTL浓度下降具有显著差异(P<0.05)。(5)各组大鼠血清SCF浓度的比较:与同时间点A组比较,C组在术后1D、3D、7D、14D血清SCF浓度下降具有显著差异(P<0.05),D组、E组在术后1D、3D、7D血清SCF浓度下降具有显著差异(P<0.05);与同时间点C组比较,D组、E组在术后7D、14D血清SCF浓度上升具有显著差异(P<0.05);C组内与1D时比较,术后3D、7D、14D血清SCF浓度下降具有显著差异(P<0.05),D组、E组内与1D时比较,术后3D血清SCF浓度下降具有显著差异(P<0.05)。(6)各组大鼠胃窦中CX43mRNA、SCFmRNA、c-KitmRNA相对表达量的比较:与同时间点A组比较,C组、D组、E组在术后3D、7D、14D时胃窦中CX43mRNA、SCFmRNA、c-KitmRNA的相对表达量下降具有显著差异(P<0.05);与同时间点C组比较,D组、E组在术后3D、7D、14D时胃窦中CX43mRNA、SCFmRNA、c-KitmRNA的相对表达量上升具有显著差异(P<0.05);C组内与1D时比较,在术后3D、7D、14D时胃窦中CX43mRNA、SCFmRNA、c-KitmRNA的相对表达量下降具有显著差异(P<0.05);D组、E组内与1D时比较,在术后 3D、7D、14D 时胃窦中 CX43mRNA、SCFmRNA、c-KitmRNA的相对表达量下降具有显著差异(P<0.05)。(7)各组大鼠胃窦中CX43、SCF、c-Kit蛋白表达水平的比较:与同时间点A组比较,在术后3D、7D、14D时C组、D组、E组胃窦中CX43、SCF、c-Kit蛋白表达水平的IOD值下降具有显著差异(P<0.05);与同时间点C组比较,在术后3D、7D、14D时D组、E组胃窦中CX43、SCF、c-Kit蛋白表达水平的IOD值上升具有显著差异(P<0.05);C组、D组、E组内与1D时比较,在术后3D、7D、14D时胃窦中CX43、SCF、c-Kit蛋白表达水平的IOD值下降具有显著差异(P<0.05)。结论:(1)急性期MCAO大鼠存在胃动力障碍,胃窦组织中CX43、SCF、c-Kit表达量均下降;(2)电针足三里、内关穴可以改善急性期MCAO大鼠胃动力,其机制可能与上调CX43表达、启动SCF/c-Kit信号通路,促进Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)增殖及改善缝隙连接有关。