【摘 要】
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蟋蟀神经肽ASTs是从其脑中分离的一种保幼激素抑制素,体外实验显示它强烈抑制昆虫咽侧体合成保幼激素.蟋蟀AST基因共编码15个AST多肽,AST基因是编码第13个多肽的序列,这个多肽含有7个氨基酸残基,一级结构为N-TSDAFGL,所以定名为AST基因.该文主要工作就是构建AST基因串联体,将构建后的串联体导入大肠杆菌进行表达分析,并在基因表达后利用表达产物进行虫效测验.根据蟋蟀神经肽AST基因序
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蟋蟀神经肽ASTs是从其脑中分离的一种保幼激素抑制素,体外实验显示它强烈抑制昆虫咽侧体合成保幼激素.蟋蟀AST基因共编码15个AST多肽,AST<,13>基因是编码第13个多肽的序列,这个多肽含有7个氨基酸残基,一级结构为N-TSDAFGL,所以定名为AST<,13>基因.该文主要工作就是构建AST<,13>基因串联体,将构建后的串联体导入大肠杆菌进行表达分析,并在基因表达后利用表达产物进行虫效测验.根据蟋蟀神经肽AST<,13>基因序列(5 ACG AGC GAC GCC TTC GGC CTG)和连接片段GKR的编码序列(5 GGC AAG CGG),参考了大肠杆菌密码子的偏爱性设计并合成如下两个引物L<,3>(5 ACG TTT GCC CAG ACC GAA)与A<,3>(5 GGC AAA CGT ACC AGC GAT GCG TTC GGT CTG),利用改进的"自身模板引物"法进行串联体的构建:先用T4 DNA polymerase进行拼接形成模板,具体操作是把A<,3>和L<,3>的水溶液按比例加好后在95℃的水浴中伸展5min,再加入T4 DNA polymerase.A<,3>、L<,3>间9个碱基配对后,在T4 DNA polymerase 5 -3 DNA聚合活性作用下,互为模板和引物,形成神经肽AST<,13>基因的拼接产物.将AST<,13>基因串联体导入大肠杆菌表达系统进行表达分析.实验中筛选了pET21b、pET22b、pET44、pET30a、IMPACT-cn和pQE30共六个表达系统,其中在pQE30表达系统中表达量较高并符合要求.以神经肽AST<,13>基因串联体在pQE30中的表达产物对甜菜夜蛾进行虫效测试.把清水、pQE空载体表达产物、A13/pQE30表达产物按1ml/10g的比例与养虫饲料混匀,喂食各处理昆虫.从喂食表达蛋白的第三天起开始记录甜菜夜蛾休长、体重和死亡数.实验结果表明,神经肽AST<,13>基因串联体表达产物对甜菜夜蛾具有一定的杀虫和抑制幼虫生长的能力.
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干旱和盐胁迫是影响作物生产布局和产量的重要因素。微生物组被认为是植物体的第二套基因组，对植物的生长和适逆至关重要。本课题主要通过对正常和盐/干旱胁迫下生长的棉花根际微生物群进行分离和测序，研究棉花根际微生物的组成，分离对棉花耐盐和抗旱有利的微生物种类及研究其功能。主要结果如下： 研究了盐胁迫条件下棉花植株与PGP根际细菌之间的相互作用。研究首先进行棉花盐胁迫处理下根际微生物的分离和培养，成功获得
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