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柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus，ApNPV)是能引起柞蚕脓病且造成柞蚕大量减产的主要病原物。目前对于昆虫病毒的致病性研究已经涉及到分子层面，但是对于从miRNA的角度研究昆虫与病原物的相互作用还处在初级阶段。MicroRNA（miRNA）广泛存在于多种生物中，长度在21-25 nt之间，参与生长、发育、分化、增殖、代谢及免疫应答和细胞凋亡等几乎所有的生物过程。随着高通量测序技术的快速发展，在miRNA的发现和探究中被广泛地应用。 本研究利用Vmir软件从ApNPV基因组中预测到多个miRNA序列。运用RNAhybrid软件对病毒成熟体VmiRNA的宿主靶基因进行预测，结果显示ApNPV基因组编码VmiRNA MD5作用的靶基因共12个，其中与免疫应答过程相关的基因2个，与免疫调节相关的基因1个，与免疫系统发育相关的基因1个。这些靶基因的GO分类结果表明它们主要集中在细胞组成、分子功能、细胞过程等方面。按照分子功能分类，主要参与细胞内分子结合、酶催化和免疫系统相关等过程中。利用实时荧光定量PCR对预测的MD5成熟体及其靶基因的表达特性进行分析，结果表明在感染ApNPV9 h后，柞蚕蛹脂肪体内检测到MD5的成熟体的表达量提高了8倍，靶基因MAPKK4/7、Ap-1-like和IRAK4的表达水平明显下调，由此推测MD5可能参与柞蚕免疫互作过程。为进一步了解VmiRNA MD5的功能，本文从ApNPV基因组中克隆了MD5基因，并且构建了真核表达载体，利用Tn-Hi5细胞筛选出过表达VmiRNA MD5基因细胞系。体外合成MD5 mimics及dsRNA沉默分子，用流式细胞仪检测经感染ApNPV-△ph/egfp+病毒的不同处理的Tn-Hi5细胞，发现miRNA MD5的过表达抑制了其抗病毒相关靶基因的表达，有利于病毒在侵染初期的增殖。转染dsRNA的经ApNPV-△ph/egfp+诱导的细胞平均荧光强度值低于正常Tn-Hi5细胞，转染MD5 mimics作用的经ApNPV-△ph/egfp+诱导的Tn-Hi5细胞平均荧光强度值高于正常细胞。因此，初步推测VmiRNAMD5参与干扰柞蚕抗病毒免疫应答。