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目的基于肝细胞膜转运体和胆酸盐(bile acids,BAs)变化分别初步探讨异烟肼(isoniazid,INH)及对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)致大鼠肝脏损伤的机制。方法1、运用LC-MS/MS建立同时测定大鼠血液、肝脏、胆汁和尿液中15种BAs的方法。2、Wistar雄性大鼠14只随机分为2组,即INH肝损伤组(INH组)与对照组(Control组),每组7只,Control组:灌胃给予等容量的生理盐水;INH组:灌胃给予INH 100 mg/kg/d。给药第60天时,将大鼠禁食12 h,称重,胆管插管接取胆汁10 min,所得胆汁用于15种BAs的分析测定;腹主动脉采血约5mL,离心,吸取上清,测定血浆中各项生化指标与各种BAs;将部分肝脏组织浸泡于10%的甲醛中,石蜡包埋后观察肝脏病理学变化,部分肝脏组织样品用于相关转运体及BAs的测定。3、Wistar雄性大鼠14只,随机分为2组,即APAP组与对照组(Control组),每组7只,Control组:灌胃给予等容量的生理盐水;APAP组:灌胃给予APAP 500 mg/kg。单次给药后大鼠禁食12 h,称重,接取胆汁,用于15种BAs的分析测定;腹主动脉采血,测定血浆中各项生化指标与各种BAs;将部分肝组织浸泡于10%的甲醛中,石蜡包埋后观察肝脏病理学变化,部分肝脏组织样品用于相关转运体和代谢酶及BAs的测定。结果1、使用Agilent HC-C18色谱柱,21分钟完成BAs的测定;检测范围为4.30ng/mL~200μg/mL;BAs在血浆、肝脏组织、胆汁和尿液基质中的日内/间准确度LQC、MQC和HQC变化范围均在80%~104%之内,精密度RSD值均小于15%;回收率均高于80%;稳定性可靠。2、INH组给药60天与Control组相比,其部分血浆生化指标呈显著上升的趋势;大鼠血浆中的鹅脱氧胆酸(CDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、熊去氧胆酸(UDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)、牛黄胆酸(TCA)和石胆酸(LCA)的含量明显升高(P<0.05);胆汁中的TUDCA、UDCA,TDCA和脱氧胆酸(DCA)的含量明显降低(P<0.05);肝脏组织中的胆酸(CA)、TCDCA、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、甘氨脱氧胆酸(GDCA)和甘氨石胆酸(GLCA)的含量明显升高(P<0.05);INH组较Control组多药耐药蛋白2(Mrp2)、多药耐药相关蛋白4(Mrp4)和有机阴离子转运多肽(Oatps)的蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),胆盐外排泵(Bsep)和Na+-牛磺酸共转运多肽(Ntcp)表达水平均无显著差异(P>0.05)。3、APAP组给药24h,与Control组相比,其部分血浆生化指标呈显著上升的趋势;血浆中的DCA、LCA、TDCA、GDCA和GLCA的含量明显升高(P<0.05);大鼠胆汁中的CDCA、GDCA、DCA和GLCA的含量明显升高(P<0.05),TUDCA含量明显降低(P<0.05);肝组织中DCA、GDCA、LCA和GLCA的含量明显升高(P<0.05);肝组织中Mrp4和Oatp2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);Mrp2、Bsep和Ntcp的蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);Cyp7a1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论1、所建立的同时测定大鼠血液、肝脏、胆汁和尿液中15种BAs的方法灵敏度和特异性较高、分析时间较短且精密度和准确度较高。2、INH导致大鼠肝损伤的机制可能与其降低肝脏Mrp2、Mrp4和Oatp2的表达水平,引起部分BAs在大鼠体内的蓄积有关;3、APAP导致大鼠肝损伤的机制可能与其降低肝脏Mrp4和Oatp2的水平,增加Cyp7a1的表达水平,引起部分BAs在大鼠体内的蓄积有关;