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本文对红树植物内生海洋细菌进行了分离,对拮抗辣椒青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)的海洋细菌菌株进行了筛选,着重对来自木榄(Bruguiera gymnorrhiza)叶片内的CⅢ-1菌株在辣椒等植物体内的定殖及其防治青枯病的作用等进行了研究。
红树植物内生海洋细菌及拮抗菌分离筛选结果表明:各品种红树体内均有大量的内生细菌,不同红树品种及部位内生细菌的数量不同,其中以红海榄(Rhizophorastylosa)体内含量最高,达4.225×10<4>cfu/g(fw),其它依次为木榄(B. gymnorrhiza)、桐花树(Aegiceras corniculatum)、秋茄(Kandelia obovata)和白骨壤(Auicennia marina)等。用对峙生长测定法从422株来自红树植物体内的海洋细菌中筛选到9株(2.13%)对青枯劳尔氏菌(R. solanacearum)具有拮抗作用的菌株,其中以来自木榄(B.gymnorrhiza)叶片内的CⅢ-1菌株拮抗作用最强,抗菌谱最广。通过形态特征、生理生化特性等测定,该菌株初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
利用抗利福平和拮抗病原菌双抗标记法,通过浸种、灌根和涂叶等接种方式测定海洋细菌CⅢ-1菌株在植物体内的定殖结果表明:该菌株的内生宿主范围较广,可以进入辣椒、番茄、茄子、白菜、生菜、豇豆、小麦、玉米、水稻等多种植物体内定殖。在辣椒体内及其根际土壤中定殖测定发现,不同接种方法菌株在辣椒体内和根际土壤中的定殖动态有所不同,与茎内相比,CⅢ-1菌株更易于在辣椒叶片及其根际土壤中定殖,定殖时间超过10d以上。
CⅢ-1菌株对辣椒青枯病室内外防病结果表明:①稀释1000倍的菌株发酵液及其除菌上清液浸种后对辣椒种子萌发有促进作用,种子萌发时间分别比清水对照提前4h和8h,胚根长分别增长20.93%和29.65%;②菌株发酵液及其除菌上清液浸种并灌根室内盆栽测定,对辣椒青枯病防治效果分别达80.77%和73.08%(21天),辣椒株高分别增加47.58%和40.73%,鲜重增加67.72%和38.60%;③CⅢ-1菌株发酵液田间灌根和用CⅢ-1发酵液与海产品加工废料研制的制剂移栽时拌土处理对辣椒青枯病防治效果分别为73.44%(菌株21天,2005年)、41.32%(菌株70天,2006年)和75.51%(制剂70天,2006年),辣椒增产分别为15.03%和38.86%(70天,2006年)。
菌株抗菌物质分离发现,CⅢ-1菌株的抗菌活性物质可能主要是一类对热不稳定的蛋白质类物质,SDS-PAGE电泳测定,其相对分子质量可能为21KD或38KD。