人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠脑缺血损伤的实验研究

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目的:观察脐带间充质干细胞移植治疗缺血性脑卒中模型鼠的效果及安全性,并探讨其可能机制。方法:采用组织块贴壁法体外分离人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs),移植前以10mg/L的BrdU标记。将SD雄性大鼠用改良线拴法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型后随机分为模型组、PBS对照组与移植组。移植组于造模后第7天,通过立体定向途径将BrdU标记后的人脐带间充质干细胞移植到大鼠损伤侧纹状体,PBS对照组给予等量PBS,模型组大鼠不做处理,另设正常组通过立体定向途径将等量脐带间充质干细胞移植到大鼠纹状体以观察免疫排斥反应。于大鼠造模前及损伤后第7、14、28、35、42、49、56d进行mNSS评分;分别于造模前、造模后1周(移植前)、细胞移植后4周对各组大鼠进行脑电图检测;移植后第7、14、30、60天处死大鼠,做免疫组化(BrdU单染、Brdu+Nestin、 Brdu+MAP-2、Brdu+GFAP、Brdu+FⅧ、Brdu+VEGF双染)组织学检查,观察移植后脐带间充质干细胞在宿主脑内存活及分化情况,正常组于移植后3天处死行免疫组织化学(MPO、CD11染色)检测。结果:1.通过组织块贴壁法分离人脐带间充质干细胞,经流式细胞仪检测所分离出的细胞,结果显示细胞表达CD44, CD29, CD49, CD54, CD106, CD13和CD90,不表达造血系细胞表面标记CD34、CD45、CD38和CD14,符合hUC-MSCs的形态及细胞表面标志物等特性,并且可在体外进行传代、扩增,具有良好的自我更新能力和多向分化潜能,证实分离所得细胞为人脐带间充质干细胞;2.用线栓法制作MCAO模型后,大鼠神经功能缺损明显;TTC染色检测缺血侧的皮层呈苍白色,证实造模成功。3.人脐带间充质干细胞移植组大鼠mNSS评分恢复优于模型组(P<0.05);PBS组mNSS评分在损伤后30d内恢复速度慢于模型组(P<0.05),至第60d与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。4.移植组大鼠脑电图移植后4周较移植前明显好转,慢波的比例减少、快波比例增加,波幅有明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。5.移植组大鼠损伤中心及周围均可见BrdU染色阳性细胞及Brdu+Nestin、Brdu+MAP-2、Brdu+GFAP、Brdu+FⅧ Brdu+VEGF免疫组织化学双染阳性细胞。结论:脐带间充质干细胞可以在体外分离培养,移植后能在鼠宿主脑内存活、分化,促进MCAO模型鼠神经功能的恢复,其机制可能与移植后细胞分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞,并分泌或促进宿主分泌神经营养因子、促进新生血管形成有关,且未观察到明显的免疫排斥反应及肿瘤形成。
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