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以苹果品种鲁加5号试管苗为试材,以石蜡切片和电镜扫描观察方法,比较了玻璃化与正常试管苗叶片和茎的显微结构；运用常规生理实验方法对玻璃化试管苗的生理特性进行测定；同时运用正交设计探讨了玻璃化现象发生的主要因素；最后运用分子生物学MSAP技术对玻璃化试管苗的DNA甲基化水平进行统计。得到以下结果：1与苹果正常试管苗相比,苹果玻璃化试管苗叶片和茎的显微结构与正常试管苗的均有显著差异,苹果玻璃化试管苗叶片的厚度变大,表皮细胞密度极低；表皮细胞体积膨大,液泡化,栅栏组织厚度减少,海绵组织厚度增加；气孔器长轴变化不明显,短轴变宽,气孔密度极高；茎的维管组织中有空洞和塌陷,导管管壁多皱褶,筛管中无淀粉粒积累。2苹果玻璃化试管苗的生理特性与正常试管苗有显著差异。与正常试管苗相比,苹果玻璃化试管苗叶片的组织总含水量显著增加,自由水含量增加43.26%,束缚水含量降低52.47%；叶绿素含量减少45.60%,膜透性增大35.43%,可溶性蛋白含量降低38.48%; SOD、POD、CAT活性均有不同程度的降低；ZT和GA3含量几乎没有差别,IAA含量增加14.66%,ABA含量降低29.00%。3气孔宽度在琼脂,蔗糖,大量元素以及光照的三水平(从低到高)下都有先减小再增大的趋势,其中影响力最大的因素(主效因子)为琼脂浓度,其次为光照强度；影响力最小的为大量元素。最适合苹果试管苗生长而不易发生玻璃化的培养基为：琼脂浓度为8 g.L-1,蔗糖浓度为30g·L-1,大量元素的量为3/4MS,光照强度为2000LX；最易发生玻璃化的培养基为：琼脂浓度为6.5 g-L-1,蔗糖浓度为25 g·L-1,大量元素的量为1/2MS,光照强度为1000LX。4在玻璃化与正常试管苗中扩增的条带数分别为303、308,其中甲基化条带总数分别为149、97,完全甲基化条带数分别为56、51,半甲基化条带总数分别为93、46；甲基化条带占总数的比例分别为49.2%、31.5%,完全甲基化条带占甲基化条带的总数的比例为37.6%、52.6%,半甲基化条带数占总的甲基化条带数的比例为62.4%、47.4%。根据玻璃化到正常苹果试管苗的甲基化带型的变化分为不变型(A)、减少型(B)、增加型(C)与不确定型(D)。类型A有39条,占甲基化条带数的比例为20.00%；类型B有43条,占甲基化条带数的比例为22.05%；类型C有93条,占甲基化条带数的比例为47.70%；类型D条带数20,占甲基化条带数的比例为10.25%。所以,甲基化程度的增加可能与苹果试管苗的玻璃化密切相关。