论文部分内容阅读
目的: 研究肿瘤抑制基因 P16、凋亡相关基因异构体 ?NP63、HPV 致癌基因 HPV16E7 和细胞转录因子 Brn-3a 在各级宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的 TCT 标本中的表达情况以及各标志物之间的关系,讨论它们作为 CIN 的生物标志物的可行性。从分子生物学水平寻找新的 CIN 检测方法,以解决临床上细胞学筛查方法漏诊率高的问题。 方法: 1. 检测 TCT 涂片中 P16、ΔNP63 的表达情况:随机抽取 71 例疑诊 CIN 的患者行 TCT 检查以及阴道镜下活组织检查。其 TCT 残留标本,在 ThinPrep 系统控制下,制作 TCT 细胞涂片,利用 SP 免疫组化法分别检测标本中 P16、ΔNP63 的表达。 2. 检测 TCT 残留标本中 HPV16 E7 和 Brn-3a 的表达情况:取上述71 例患者的 TCT 残留标本,用 RT-PCR 法分别检测各标本中 HPV16E7和 Brn-3a mRNA 的表达。 结果: 1. 71 例患者的 TCT 细胞学诊断结果包括:13 例未见癌变或上皮内瘤变(Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy,NILM),17例不典型鳞状上皮细胞(Atypical squamous cell,ASC),19 例低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL),22 例重庆医科大学硕士研究生学位论文 4高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL);病理诊断结果包括2:1 例炎症1,9 例 CINⅠ1,0 例 CINⅡ2,1 例 CINⅢ 。2. TCT 涂片中 P16 阳性表达于核异常的鳞状上皮细胞和腺上皮细胞浆中。各级细胞学诊断的 P16 阳性率分别为 NILM(15.38%),ASC(54.55%),LSIL(95.45%),HSIL(100%),HSIL 与 NILM 以及 LSIL与 NILM 的 P16 阳性率进行比较,差异有极显著性(P<0.0001),HSIL与 LSIL 以及 NILM 与 ASC 比较,差异无统计学意义(P>0.05);各级病理学诊断中 P16 阳性率分别为炎症(4.76%),CINⅠ(89.47%),CINⅡ(100%),CINⅢ(100%),各级 CIN 与炎症的 P16 阳性率进行比较,差异有极显著性(P<0.0001),各级 CIN 的阳性率进行两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3. TCT 中 ?NP63 阳性表达于核异常的鳞状上皮细胞和部分腺细胞中。在细胞学诊断中 ?NP63 阳性率分别为 NILM(15.38%),ASC(47.06%),LSIL(89.47%),HSIL(95.45%),HSIL 的 ?NP63 阳性率高于 NILM、HSIL 与 ASC 组,LSIL 高于 NILM(P<0.001),HSIL与 LSIL 以及 NILM 与 ASC 比较,差异无显著性(P>0.05);在病理学诊断中,?NP63 阳性率分别为炎症(4.76%),CINⅠ(84.21%),CINⅡ(100%),CINⅢ(100%),各级 CIN 的 ?NP63 阳性率高于炎症组(P<0.001),各级 CIN 的阳性率进行比较,差异无统计学意义(P>0.05) 。4. HPV16 E7 mRNA 表达按细胞学分级其阳性率分别为 NILM(7.69%),ASC(29.41%),LSIL(31.58%),HSIL(59.09%),HSIL的 HPV16 E7 阳性率高于 NILM 组(P<0.008),NILM 与 ASC、NILM与 LSIL 以及 LSIL 与 HSIL 进行比较,差异无显著性(P>0.05);按病理学分级 HPV16 E7 阳性率为炎症(0%),CINⅠ(31.58%),CINⅡ(60%),CINⅢ(61.90%),CINⅡ和 CINⅢ的 HPV16 E7 阳性率均高于炎症组(P<0.001),各级 CIN 的阳性率进行两两比较,差异无显著重庆医科大学硕士研究生学位论文 5性(P>0.05)。5. Brn-3a mRNA 的阳性率在细胞学分级中分别为 NILM(7.69%),ASC(23.53%),LSIL(21.05%),HSIL(72.73%),HSIL 的 Brn-3a阳性率明显高于 NILM、ASC 以及 LSIL 组(P<0.001),NILM、ASC与 LSIL 之间进行两两比较,差异无显著性(P>0.05);在病理学分级中 Brn-3a 的表达阳性率分别为炎症(0%),CINⅠ(5.26%),CINⅡ(50%),CINⅢ(90.48%),CINⅢ的 Brn-3a 阳性率明显高于与炎症、CINⅠ组(P<0.0001),炎症与 CINⅠ以及 CINⅡ与 CINⅢ比较,差异无显著性(P>0.05)。6. P16 与 ?NP63 作为 CIN 的诊断标志物,其结果是一致的(P<0.05)。HPV 致癌基因 HPV16 E7 与细胞转录因子 Brn-3a 作为 CIN和 HR-HPV 活化状态的诊断标志物,其结果是一致的(P<0.05)。结论:1. 过度表达的肿瘤抑制因子 P16 可成为 CIN 的标志物,辅助细胞学筛查,其阳性染色不仅有利于诊断异常鳞状上皮细胞,还可用于识别异常腺上皮细胞,并推测过度表达的 P16 有助于识别 ASC 中存在的瘤变亚型。2. 凋亡相关基因异构体 ?NP63 在宫颈异常鳞状上皮和腺上皮细胞中的高表达,可作为筛查 CIN 可靠的生物标志物,辅助细胞学筛查,降低漏诊率。3. P16 与 ?NP63 的过度表达与宫颈早期瘤变发生、发展关系密切,推测两者之间可能存在正向协同作用,并参与宫颈瘤变过程。4. HPV 致癌基因 HPV16 E7 作为 CIN 的生物标志物,并可直接说明患者体内 HR-HPV 活化状态。5. 细胞转录因子 Brn-3a 参与宫颈瘤变发展的过程,可作为另一个CINⅡ和 CINⅢ的生物标志物,并可成为 HPV 致癌基因转录活性的间