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背景与目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是导致人类急性和慢性肝脏疾病的重要病原体。据世界卫生组织报道,全球约20亿人感染过HBV,其中3～4亿人为慢性HBV携带者。在全球疾病前10位死亡原因中,乙型肝炎占第七位。全球每年约有100万人死于由HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。中国是HBV感染高流行区,2002年中国人群的乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)标化阳性率为9.09%,HBV标化流行率为50.04%。2006年我国卫生部对全国人群乙肝血清流行病学的调查结果显示:全国1～59岁人群HBsAg携带率为7.18%,全国人群乙肝抗体阳性率为50.09%,慢性乙型肝炎中,肝硬化失代偿的年发生率约3%,5年累计发生率约16%,其中6%～15%可发展为肝细胞癌(HCC)。因此,HBV感染是中国也是世界的重要公共卫生问题。乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)是反映HBV复制活跃程度及传染性的最直接的指标,也是观察抗病毒药物疗效、预后及指导抗病毒药物应用的最重要指标之一。研究发现基线水平HBV DNA与肝硬化发生密切相关,与肝细胞肝癌的发生表现为明显的“剂量—效应”关系,持续高病毒载量是乙肝病情进展的主要原因。HBV DNA定量的检测从根本上突破了免疫学方法等间接检测方法的局限性,通过直接检测病毒核酸水平,可真实地反映患者体内病毒的水平。目前HBV DNA定量检测方法主要有两类,一类是以聚合酶链反应(PCR)为基础,如实时荧光定量PCR(FQ-PCR)等。另一类是以核酸杂交为基础,如斑点杂交和液相杂交等。美国FDA批准、国际公认HBV DNA定量的检测方法是罗氏公司生产的在国际上具有参比价值的COBAS Amplicor等HBV DNA定量检测方法,由于其试剂价格昂贵,且必须采用罗氏公司专用PCR仪,故在我国难以广泛使用。目前,我国SFDA已批准多个实时FQ-PCR试剂用于HBV DNA检测,但与国际上公认的COBAS Amplicor试剂在检测结果上的差异尚不明确。为了了解目前我国国产实时FQ-PCR试剂与COBAS Amplicor试剂检测HBVDNA的差异,我们进行了本研究。材料和方法:本研究于2007年12月～2008年4月期间,对山东省17地市32家医疗机构的实验室应用的国产FQ-PCR试剂进行了调查。其中,国产试剂A占34%,B试剂占50%,其余试剂共占16%。于2008年4月～6月期间,本研究组根据罗氏COBAS Amplicor方法的检测结果,从某药物临床试验保存的系列慢性乙型肝炎(CHB)血清标本中抽取了151份标本,其中HBV DNA＜300copies/mL者16份,≥300且＜10~3copies/mL者24份,≥10~3且＜10~5copies/mL者39份,≥10~5且＜10~7copies/mL者47份,≥10~7copies/mL者25份。分别采用国产试剂A和试剂B对其进行了HBV DNA平行检测,分析了两种国产试剂的敏感度、特异度及其与罗氏COBAS Amplicor方法检测结果的相关性。同时,为了分析国产试剂的稳定性,我们抽取其中11份血清样本用试剂A和试剂B进行了复核。实验结果采用SPSS统计软件进行分析。结果:151份标本中,有103份全部3种试剂检测均有检测值(Ct值)报告,其余48份至少1种试剂无Ct值结果报告。对这103份标本的检测结果进行统计分析显示:罗氏COBAS Amplicor、试剂A、试剂B的检测结果(均数±标准差,log10copies/mL)分别为(5.87±1.64)、(5.11±1.34)、(4.93±1.35)log10copies/mL,试剂A、试剂B与COBAS Amplicor检测结果的相关系数分别为0.947、0.937。3种试剂检测结果总体差异有统计学意义(F=12.32,P＜0.05),试剂A、试剂B与COBAS Amplico的检测结果的差异有统计学意义(P＜0.05)。对低HBV载量(≥10~3且＜10~5copies/mL)标本检测的结果,试剂A、试剂B与COBAS Amplicor的相关性较低(相关性分别为:0.609,0.422)。以COBAS Amplicor检测结果为准,试剂A、试剂B的总体灵敏度分别为90.4%、77.0%,总体特异度分别为56.3%、100%。11份复核样本的检测结果与初测结果的差异无统计学意义。结论:国产试剂A、B检测结果虽与罗氏COBAS Amplicor方法检测结果仍有一定差异,但是相关性较好,且稳定性良好。这两种试剂的检测结果能基本反映血清HBV DNA的水平,有助于临床医师了解慢性乙型肝炎患者体内病毒复制水平和抗病毒治疗的效果。试剂A、B与COBAS Amplicor的相关性在低HBV载量标本较高HBV载量标本低,提示试剂A、B检测HBV DNA的线性范围较窄,对低载量的HBV DNA的定量结果可靠性差。因此用于监测抗病毒疗效时,需综合考虑生化学和免疫学指标。尤其当HBV载量低时应结合血清标志物检测和其他检查结果以及临床表现综合判断以排除假阳性与假阴性;必要时要及时复查HBV DNA。试剂A灵敏度较B高,但假阳性率高;试剂B的特异度高,但假阴性多见。在HBV载量较低时试剂A误检多,试剂B漏检多。这说明国产试剂与罗氏COBAS Amplicor相比还存在差距。医院在选择国产HBV DNA试剂时,应尽量选用同一种试剂;临床医师在动态观察HBV DNA水平、判定疗效和监测早期耐药发生时,应尽量参考同一医院和同一种试剂的检测结果,必要时可用COBAS Amplicor验证。