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目的:我们之前的研究证明,包含甘氨酸(Gly)的新型三肽GCF在大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)损伤条件下能够穿透血脑屏障(BBB),并发挥神经保护作用。但是,在临床实践中相当数量病人被送入医院时仍处于血栓堵塞状态,本课题的主要研究目的是:1)验证GCF是否在溶栓和取栓前早期静脉给药仍可穿过血脑屏障到达缺血损伤区并发挥保护作用;2)验证GCF鼻腔给药是否可以透过血脑屏障到达缺血损伤脑区。方法:通过高效液相色谱法(HPLC)检测正常以及缺血损伤脑组织中甘氨酸水平。HPLC检测中风体外模型,即氧糖剥夺模型中的神经元胞内甘氨酸水平。在离体情况下采用FDA/PI,LDH,MTT检测GCF对OGD损伤后的皮层神经元存活的影响,发现GCF对神经元细胞有保护作用。采用免疫荧光的方法测定缺血后再灌注大鼠静脉注射FITC-GCF后,肽可以进入大脑并定位于缺血区。采用高效液相色谱的方法检测缺血再灌注大鼠静脉注射GCF后,肽在脑中的酶解情况。采用MCAO模型在缺血不同时间点后灌注看大鼠在不同时间点的存活率。采用TTC染色方法检测缺血再灌注大鼠静脉注射GCF后对大鼠的存活率的影响以及对存活大鼠的脑保护作用。在缺血再灌注模型中,静脉注射这两种带荧光的肽来检测入脑情况。采用FDA/PI染色,LDH,MTT和TTC染色方法分别从离体和在体上检测以合成GCF的理论基础上其他合成的肽在缺血脑中的定位以及对神经元存活的影响。结果:1.缺血性脑损伤后胞外甘氨酸升高但神经元胞内Gly减少2.Gly具有神经保护作用3.Gly具有低的膜通透性3.1 Gly具有低的BBB通透性;3.2 Gly具有很低的细胞膜通透性。4.穿膜小肽通过递送Gly发挥神经保护作用4.1穿膜小肽在缺血再灌注损伤条件下具有神经保护作用;4.2穿膜小肽在不同梗塞状态下给药的神经保护作用。1)GCF-FITC在缺血后立即静脉注射,2 h,4 h,6 h后透过血脑屏障,并定位在缺血区;2)GCF在缺血再灌注前静脉给药可发挥神经保护作用;缺血后立即给药,在2 h,4 h,6 h梗塞后再灌,GCF减少缺血面积;3)GCF在持续梗塞状态下静脉给药可发挥神经保护作用:缺血后立即给药,在12 h和24 h持续梗塞状态下减少死亡率和缺血体积;5.FITC-GCF鼻腔给药可透过血脑屏障进入大脑。结论:1、穿膜小肽GCF在缺血同时给药具有神经保护作用;2、穿膜小肽GCF在持续梗塞状态下早期给药具有神经保护作用;3、GCF鼻腔给药可透过血脑屏障进入大脑。