【摘 要】
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目的:树鼩作为研究人类疾病的模式动物受到广泛关注,是目前很有发展潜力的小型实验动物。树鼩全基因组测序证实了其在亲缘关系上与人非常接近,是良好的实验模式动物。但是用于树鼩的研究工具的缺乏,限制了其作为实验动物的应用。本课题使用人、小鼠和大鼠抗体芯片检测R837（Imiquimod）激活Toll样受体7（Toll-like receptor 7,TLR7）后效应分子的表达:白介素1β（interleu
【基金项目】
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广西高发传染病中西医结合转化医学重点实验室； 实验模式动物树鼩MyD88信号通路的初步研究（国家自然科学基金,No.31460243）； 广西瑶山亚种树鼩TLR8及信号通路的生物信息学研究（广西中医药大学广西特色实验动物病证模型重点实验室开放课题）； 广西科学研究与技术开发计划自治区主
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目的:树鼩作为研究人类疾病的模式动物受到广泛关注,是目前很有发展潜力的小型实验动物。树鼩全基因组测序证实了其在亲缘关系上与人非常接近,是良好的实验模式动物。但是用于树鼩的研究工具的缺乏,限制了其作为实验动物的应用。本课题使用人、小鼠和大鼠抗体芯片检测R837（Imiquimod）激活Toll样受体7（Toll-like receptor 7,TLR7）后效应分子的表达:白介素1β（interleukin 1 beta,IL-1β）、白介素6（interleukin 6,IL-6）、IFN-γ诱导的单核因子（monokine induced by in terferonγ,MIG）、趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1α（chemokine macrophag e inflammatory protein 1 alpha,MIP-1α）、趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1β（chemokine macrophage inflammatory protein 1 beta,MIP-1β）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）。并从m RNA和蛋白水平对效应分子进行验证,同时筛选出可用于树鼩m RNA检测用引物,为树鼩作为实验动物的进一步发展提供良好的研究工具。方法:1.分离并培养树鼩脾细胞;使用抗体芯片检测R837刺激TLR7后细胞上清和裂解液中表达上调的效应分子;2.分离树鼩、大鼠、小鼠的脾细胞和人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,P BMCs）并与R837共同孵育;用实时荧光定量PCR（Real-time Quantitat ive PCR,q PCR）分别检测IL-1β、IL-6、MIG和MIP-1β、TNF-α、MI P-1α的m RNA表达;3.实验数据采用Graph Pad Prism 5软件进行绘图,使用SPSS 21软件进行统计分析。两组非配对样本使用独立样本t检验分析法,p<0.05为具有统计学差异。结果:1.抗体芯片筛选出了树鼩脾细胞经R837刺激后,与TLR7信号通路活化密切相关且表达上调的6种效应分子:IL-1β、IL-6、MIG、MIP-1α、MIP-1β和TNF-α;2.q PCR结果显示除了树鼩脾细胞IL-1β、MI P-1α经R837刺激后其m RNA水平表达下调外,树鼩、大鼠、小鼠脾细胞及人PBMCs经R837刺激后,IL-6、MIG、MIP-1β和TNF-α分子的m RNA水平均表达上调,且树鼩脾细胞与人PBMCs中4种效应分子的表达有统计学意义（p<0.05）。结论:1.抗体芯片筛选出了树鼩脾细胞经R837刺激后,与TLR7信号通路密切相关且表达上调的6种效应分子,分别可用人的抗体来检测树鼩IL-1β、IL-6、MIG、MIP-1β,小鼠的抗体来检测树鼩MIP-1α,大鼠的抗体来检测树鼩TNF-α;2.树鼩脾细胞IL-6、MIG、MIP-1β和TNF-α等效应分子的m RNA水平表达上调,同抗体芯片的结果一致,同时探索了树鼩IL-6、MIG、MIP-1α、MIP-1β和TNF-α等效应分子检测用引物;3.我们的研究结果,为应用树鼩作为研究TLR7信号通路的动物模型建立了一种可行的检测方案。
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