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共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是一类具有共轭双键的亚油酸同分异构体的总称。大量的实验表明,CLA具有抗癌、抗动脉粥样硬化,提高免疫力、减少脂肪沉积等多种生理活性功能,但是目前国内外研究者还未能完全将各CLA异构体与其生物活性一一对应起来,因此,拆分CLA异构体获得单一组分具有重要的意义。共轭亚油酸异构体的酶法拆分已有一些报道,多采用Lipase AY30催化反应,而采用脂肪酶Lipase AYS拆分的鲜有报道。脂肪酶经过固定化之后,会具有操作稳定性好、贮存稳定性好、可重复利用的特点。因此,本研究决定采用游离脂肪酶Lipase AYS以及其固定化酶分别拆分共轭亚油酸以制备高纯度的CLA异构体。主要的研究结果如下:1.Lipase AYS催化拆分共轭亚油酸。采用来源于Candida rugosa的脂肪酶Lipase AYS对共轭亚油酸进行拆分,并对产物进行了分离。确定了最优反应条件为:甲醇作为反应底物、温度为40℃、加酶量180 U/g、缓冲液pH为6.5、CLA与甲醇摩尔比为1:1。最优条件下,反应8 h,CLA的酯化率可达49.5%,分离最终产品,可以得到c9,t11-CLA甲酯和t10,c12-CLA的拆分效率分别为86.2%和80.0%,回收率分别为72.4%和54.2%。2.Lipase AYS的固定化及其性质研究。对Lipase AYS进行了固定化的研究,筛选了7种不同类型的树脂,确定了环氧树脂ECR8285固定化Lipase AYS时效果最佳。最佳固定化条件为:酶与载体的比例为60 mg/g,最适缓冲液pH为7.0。在该条件下得到的固定化酶,水解酶活为1446 U/g。同时还对固定化酶Lipase AYS进行了一些简单的性质研究,实验结果表明,该酶在40℃的时候具有最优的催化温度;具有良好的贮存稳定性,4℃冰箱存放60天后,仍具有92%的原始酶活力;具有良好的操作稳定性,经过5批次实验后仍保持原始酶活力的80%。3.固定化酶Lipase AYS催化拆分共轭亚油酸。采用固定化酶Lipase AYS催化拆分共轭亚油酸,确定了反应最佳条件为:温度40℃、酶加量150 U/g、反应底物CLA和甲醇的比例为1:1,在此反应条件下,反应6 h,终止反应,分离反应产物可以得到c9,t11-CLA甲酯和t10,c12-CLA的拆分效率分别为86.0%和82.9%,回收率分别为70.8%和63.8%。比较游离酶和固定化酶酯化效果,可以得出结论,两者催化共轭亚油酸和甲醇反应,产物的脂肪酸组成相似,但是固定化酶具有反应时间快、酶的重复稳定性高以及有利于回收的特点。