【摘 要】
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目的 研究长链非编码RNAs（long non-codingRNAs,lncRNAs）在肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）患者血浆外泌体中的表达谱情况及差异表达的lncRNAs在LUAD中可能的作用机制,发现对LUAD有潜在诊断价值的lncRNAs。方法1.通过透射电镜（transmission electron microscope,TEM）对血浆外泌体进行形态学观察及W
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目的 研究长链非编码RNAs（long non-codingRNAs,lncRNAs）在肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）患者血浆外泌体中的表达谱情况及差异表达的lncRNAs在LUAD中可能的作用机制,发现对LUAD有潜在诊断价值的lncRNAs。方法1.通过透射电镜（transmission electron microscope,TEM）对血浆外泌体进行形态学观察及Western blot检测其分子标记物。2.应用高通量测序筛选5例LUAD患者和5例健康对照者血浆外泌体中差异表达的lncRNAs,对差异表达的lncRNAs的靶基因进行GO分析和KEGG信号通路分析预测lncRNAs可能参与的功能。3.实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）验证差异表达的lncRNAs,卡方检验用于探索差异表达lncRNAs表达水平与各临床参数的相关性。4.电化学发光技术检测LUAD患者和健康对照者血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）水平,受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curves,ROC）用于评估lncRNAs和CEA对LUAD的诊断效能。结果1.经TEM观察到血浆中外泌体的大小在40～120 nm,Western blot显示其表达CD9、CD63。2.高通量测序结果显示,相对于健康对照者,LUAD患者血浆外泌体中有18个lncRNAs表达上调,431个lncRNAs表达下调。GO分析结果显示差异表达的lncRNAs与蛋白质磷酸化的调节、经典Wnt途径的调节、颗粒腔、胞质囊腔、囊腔、整合素结合、血小板衍生生长因子等相关。KEGG信号通路分析显示差异表达的的lncRNAs与PI3K-Akt信号通路相关。3.qRT-PCR结果显示RP11-466L17.1在LUAD患者血浆及血浆来源外泌体中表达水平显著低于健康对照者,在LUAD细胞A549中表达水平低于正常支气管上皮细胞Beas-2b。RP11-466L17.1在血浆中表达水平与性别、年龄、是否抽烟、TNM分期无关。4.血浆RP11-466L17.1及血清CEA的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.724（95%CI:0.625～0.808）、0.755（95%CI:0.659～0.835）。当两者联合时ROC曲线下面积为0.788（95%CI:0.718～0.897）,联合诊断效能高于单独指标。结论LUAD患者与健康对照者的血浆外泌体lncRNAs表达谱存在差异,差异表达的lncRNAs可能参与LUAD的发生。RP11-466L17.1在LUAD患者血浆及血浆来源外泌体中表达水平显著低于健康对照者,RP11-466L17.1有望成为LUAD诊断的分子标志物。
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