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刚地弓形虫是一种原生动物寄生虫,也是常见的一种人畜共患病。根据流行病学调查我们普遍认为只感染温血动物。但是,从远离猫粪污染的草食动物和鸟类的流行病学调查也显示出高感染率。实验室前期研究显示,媒介节肢动物蜱可作为弓形虫在自然界的保存宿主。为全面了解自然条件下,蜱体感染弓形虫的情况,本研究开展不同地点、不同宿主来源和不同种类的蜱体携带弓形虫的分子检测,并对阳性样本中的弓形虫基因进行分型,以期为弓形虫流行病学研究提供资料。(1)本研究对1275份蜱DNA样品进行定量PCR分子检测,共发现88份为阳性样本,阳性率为6.90%。其中检测的吸血蜱样本总数为848份,阳性样本数为55份,阳性率为6.49%;检测的未吸血蜱样本总数为427份,阳性样本数为33份,阳性率为7.73%。(2)在吸血蜱中,成蜱携带弓形虫的阳性率为7.69%,若蜱携带弓形虫的阳性率为1.90%;幼蜱携带弓形虫的阳性率为0;在未吸血蜱中,成蜱携带弓形虫的阳性率为7.96%,若蜱携带弓形虫的阳性率为0;幼蜱携带弓形虫的阳性率为14.29%。(3)不同蜱种的阳性率差异并不大。在吸血蜱中,长角血蜱携带弓形虫的阳性率为8.05%;血红扇头蜱携带弓形虫的阳性率为7.50%;镰形扇头蜱携带弓形虫的阳性率为12.12%;微小牛蜱携带弓形虫的阳性率为0;草原革蜱携带弓形虫的阳性率为10%;褐黄血蜱携带弓形虫的阳性率为3.07%;血蜱属携带弓形虫的阳性率为20%;扇头属携带弓形虫的阳性率为5.22%以及未鉴定蜱种携带弓形虫的阳性率为0。在未吸血蜱中,长角血蜱携带弓形虫的阳性率为7.67%;血红扇头蜱携带弓形虫的阳性率为8.7%;镰形扇头蜱携带弓形虫的阳性率为8.33%;扇头属携带弓形虫的阳性率为6.25%以及未鉴定蜱种携带弓形虫的阳性率为0。(4)对所有通过定量PCR检测显示出携带弓形虫的阳性样本再用巢式PCR方法进行检测,均成功扩增出目的条带,将目的条带进行胶回收并送测序,测序所得结果与数据库标准序列进行比对,与弓形虫529-bp重复序列片段相似程度高达99%以上。说明所有阳性样本均携带弓形虫。(5)采用巢式PCR方法对所有使用定量PCR方法检测出携带弓形虫的阳性样本进行基因分型,结果显示所有阳性样本均为弓形虫ME49虫株,即弓形虫Ⅱ型弱毒株。(6)构建吸血蜱阳性样本与未吸血蜱阳性样本数据进化树,并对数据进行卡方检验分析其显著差异性。发现吸血蜱与未吸血蜱之间的差异不显著。综上所述,本研究发现自然界蜱感染弓形虫较为普遍,蜱总体感染阳性率为6.90%;在检测的6种硬蜱中,5种蜱均感染,不同蜱种的阳性率无显著差异;在蜱的三个不同发育阶段,相较而言成蜱感染率较高,吸血蜱与未吸血蜱之间的差异不显著。基因分型结果显示,所有阳性样本均为弓形虫Ⅱ型。根据实验结果我们可以发现蜱携带弓形虫在流行病学中具有重要意义,人类弓形虫感染需要高度重视。