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目的:1.在大鼠腰段脊髓损伤模型基础上局部给予小剂量A型肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,BoNT/A HC),观察其对脊髓损伤后局部总体蛋白表达谱的影响;2.观察BoNT/A HC对脊髓损伤局部髓磷脂相关糖蛋白及其受体表达的影响,为探讨BoNT/A重链促进神经突起再生的机制提供实验依据。方法:1.采用1ml注射器针头改制的脊髓损伤器械复制大鼠腰段脊髓半离断性损伤模型;在模型复制同时由针头所连接微量注射器向髓腔内注射不同剂量BoNT/A重链(2μg、4μg、6μg和8μg);2.于大鼠脊髓损伤后2天和20天提取损伤局部及损伤近端2~3cm组织蛋白进行SDS-PAGE+考马氏亮蓝染色确定蛋白表达有无差异,同时采用BoNT/A重链6mg剂量组进行双向电泳+硝酸银染色进一步确定蛋白表达差异的点数或点群分布;3.根据双向电泳所出现的点群变化的分子量水平,采用western blot主要检测BoNT/A重链对脊髓组织髓磷脂相关抑制因子—髓鞘相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein,MAG)及其受体(nogo-receptor,N gR)的表达的干预作用。结果:1.单侧腰段脊髓损伤模型显微镜下呈现明显的一侧脊髓结构破坏,局部神经细胞坏死、白质神经传导束崩解不可辨认;2.SDS-PAGE+考马斯亮蓝染色显示,单纯脊髓损伤后,损伤局部蛋白表达与正常相比有明显不同,有些分子量水平的蛋白表达明显增多;BoNT/A重链用药后2天及20天时,局部蛋白的表达与单纯损伤组相比明显不同,但与正常对照组类同、趋向正常化;3.双向电泳+硝酸银染色的结果进一步确定了这些蛋白表达变异的现象出现在多个分子量水平,呈现点或点群的表达变异。有10余种蛋白表达与单纯损伤组明显不同,呈向正常转化的趋势;主要的特点是:单纯损伤时,某些蛋白点或点群表达增加,而BoNT/A重链干预后,这些变异又趋向于与正常对照组相似;4.根据蛋白表达变异的分子量特点,选取MAG和NgR作为目标蛋白的wesetrb-blot结果显示:单纯脊髓损伤后MAG及NgR表达皆呈现增多,而髓腔内注射BoNT/A重链后这两种蛋白的表达均减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.BoNT/A重链可干预大鼠脊髓损伤后局部蛋白表达谱变化;2.BoNT/A重链可逆转脊髓损伤后局部大量髓磷脂抑制因子的产生及其受体的表达。