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目的肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤中具有自我更新能力，目前大部分学者认为是恶性肿瘤复发、耐药、转移及持续生长的根源。本文研究的目的在于从人低分化胃癌细胞系MGC803中分离出胃癌干样细胞，初步证明其具有肿瘤干样细胞的特性；观察二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）对胃癌干样细胞的生长抑制作用，分析其作用机制与Sonic hedgehog信号通路中Shh、Gli1表达的关系。方法1、无血清培养法培养MGC803肿瘤细胞球；流式细胞技术检测胃癌干样细胞和MGC803细胞的CD44、CD24的表达率；通过荧光显微镜观察二者细胞CD24、CD44的阳性表达；MTT、Transwell侵袭实验、软琼脂集落形成实验观察胃癌干样细胞的增殖和侵袭能力；RT-PCR、Western blot技术分别从mRNA和蛋白水平检测干细胞信号通路相关调控基因Shh、Gli1在胃癌干样细胞中表达的变化。2、MTT、软琼脂集落形成实验观察DADS对胃癌干样细胞增殖能力的影响；RT-PCR、Western blot技术从mRNA和蛋白水平分析DADS对胃癌干样细胞中Shh、Gli1表达的影响。结果1．无血清培养法培养胃癌干样细胞发现，孔板内肿瘤细胞呈球状生长，形成典型肿瘤球。流式细胞术结果显示，胃癌干样细胞组CD24阳性细胞的比例高达91.21%，胃癌MGC803细胞中CD24阳性细胞的百分比为45.56%；胃癌干样细胞组CD44阳性细胞的比例高达91.93%，胃癌MGC803细胞中CD44阳性细胞的百分比为82.99%，分离的细胞可以初步认为是胃癌干样细胞。2．荧光显微镜下观察可见孵育了CD24抗体和CD44抗体的胃癌干样细胞组胞膜上呈现强绿色荧光，阳性表达率高，而胃癌MGC803细胞上只有个别细胞有微弱荧光，阳性表达率低。3. MTT实验结果显示：胃癌干样细胞的OD值（0.889±0.042）明显大于MGC803细胞（0.494±0.029），提示胃癌干样细胞的增殖能力明显高于MGC803细胞（P<0.05）。软琼脂集落形成实验结果显示，与MGC803细胞（10.17±1.7）相比，胃癌干样细胞集落形成数（29.83±1.4）明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。在集落形态上，胃癌干样细胞和MGC803细胞相比，集落直径明显变大，且集落中细胞数目增加。Tanswell侵袭实验可见胃癌干样细胞中穿透微孔膜的细胞个数（636±45）明显多于MGC803细胞（170±21），差异有统计学意义(P<0.05)。4. RT-PCR结果显示：胃癌干样细胞中Shh基因和Gli1基因mRNA表达均明显高于胃癌MGC803细胞(P<0.05)。Western blot结果显示：SHH蛋白和GLI1蛋白在胃癌干样细胞均表达明显高于胃癌MGC803细胞(P<0.05)。5. MTT结果显示：30mg/L DADS处理48h后胃癌干样细胞组OD值（0.530±0.319）和胃癌MGC803细胞组OD值（0.352±0.027）明显低于未处理胃癌干样细胞组（0.826±0.032）、MGC803细胞组（0.565±0.023）(P<0.05)；然而DADS处理后胃癌干样细胞组OD值（0.530±0.319）还是高于DADS处理MGC803细胞（0.352±0.027）(P<0.05)。6.软琼脂集落形成实验发现，DADS处理后胃癌干样细胞组形成的集落小于未处理的胃癌干样细胞组，且集落形成数目(15±1.5)也少于未处理组(35.5±2.5)(P<0.05)。DADS处理MGC803细胞后形成的集落比未处理MGC803细胞组小，且集落形成数目(6.5±0.5)远远少于未处理组(14.5±0.5)(P<0.05)。我们还将DADS处理后MGC803细胞、胃癌干样细胞两组进行比较发现，DADS处理后MGC803细胞所形成的集落也小于胃癌干样细胞，且集落形成数目(6.5±0.5)也比胃癌干样细胞组(15±1.5)少(P<0.05)。7. RT-PCR实验结果：用浓度为30mg/L的DADS处理MGC803细胞和胃癌干样细胞48h后Shh、Gli1基因表达均明显下调(P<0.05)。Western blot结果同样显示，浓度为30mg/L的DADS处理48h可明显抑制MGC803细胞和胃癌干样细胞中SHH、GLI1蛋白表达(P<0.05)。结论1、初步分离和鉴定了人胃癌细胞MGC803细胞系中的胃癌干样细胞；2、DADS可抑制胃癌干样细胞、胃癌MGC803细胞的增殖，其机制可能与下调Shh、Gli1表达有关。