论文部分内容阅读
目的：淋巴道转移作为恶性肿瘤转移的早期形式，至今仍缺乏有效的干预措施。最近的研究表明，淋巴管生成在肿瘤淋巴道转移中起非常重要的作用，且淋巴管生成与VEGF-C/VEGFR-3信号传导通路密切相关。众多临床研究数据表明，具有传统中药成分的华蟾素注射液能够明显抑制患者多种肿瘤淋巴道转移，然而其作用机制至今尚未明确。本研究主要通过观察不同浓度的华蟾素注射液对肿瘤淋巴管生成的影响，初步探讨淋巴道转移可能的分子机制。方法：以人肝癌HepG-2细胞和人淋巴管内皮细胞（HLEC）建立transwell共培养系统，分别观察不同浓度的华蟾素注射液作用下的HLEC及HLEC与人肝癌HepG-2细胞共培养系统。结果如下：1.通过绘制细胞生长曲线，分别观察不同浓度的华蟾素注射液与人HepG-2细胞对HLEC增殖的影响。2.通过细胞迁移实验，分别观察不同浓度的华蟾素注射液与人HepG-2细胞对HLEC迁移的影响。3.通过基质胶实验，分别观察不同浓度的华蟾素注射液与人HepG-2细胞对HLEC管状结构形成的影响。4.采用蛋白免疫印迹法（Western-blot法），分别观察不同浓度的华蟾素注射液对HLEC中VEGFR-3蛋白表达的影响。5.采用蛋白免疫印迹法（Western-blot法），分别观察不同浓度的华蟾素注射液对HLEC中HGF蛋白表达的影响。结果：1.不同共度的华蟾素注射液对HLEC的影响。（1）华蟾素注射液能够显著抑制HLEC增殖(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。（2）华蟾素注射液能够显著抑制HLEC迁移(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。（3）华蟾素注射液能够显著抑制HLEC管状结构形成(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。（4）华蟾素注射液能够显著抑制HLEC中VEGFR-3蛋白的表达(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。（5）华蟾素注射液能够显著抑制HLEC中HGF蛋白的表达(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。2.不同浓度的华蟾素注射液对与人HepG-2细胞共培养的HLEC的影响。（1）华蟾素注射液能够显著抑制与人HepG-2细胞共培养的HLEC增殖(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。（2）华蟾素注射液能够显著抑制与人HepG-2细胞共培养的HLEC迁移(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。（3）华蟾素注射液能够显著抑制与人HepG-2细胞共培养的HLEC管状结构形成(P＜0.05)，并呈剂量依赖性。3.人HepG-2细胞对HLEC的影响。（1）人HepG-2细胞能够显著促进HLEC增殖(P＜0.05)。（2）人HepG-2细胞能够显著促进HLEC迁移(P＜0.05)。（3）人HepG-2细胞能够显著促进HLEC管状结构形成(P＜0.05)。结论：通过比较分析上述实验结果可知，华蟾素注射液能够显著抑制HLEC淋巴管生成。抑制HLEC中VEGFR-3蛋白和HGF蛋白的表达可能是华蟾素注射液抑制HLEC淋巴管生成的机制之一。人HepG-2细胞能够显著促进HLEC管状结构形成。