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引言：胃癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，化疗是中晚期胃癌的主要治疗方法，然而，由于肿瘤多药耐药(multidrug resistance，MDR)的产生，常常导致化疗的失败，MDR已成为胃癌化疗失败的主要原因之一，因此，深入研究胃癌MDR机制和克服方法，将有可能带来胃癌治疗新突破。蛋白质是细胞生命活动及其功能的主要执行者，直接从蛋白质整体水平来研究肿瘤MDR的产生机制、筛选耐药相关蛋白对于揭示肿瘤MDR无疑具有重要价值。蛋白质组学作为后基因组时代研究的一个重要内容，为生命科学提供一个新的研究平台，同时为肿瘤MRD的研究带来新的思维方式和研究领域，将有可能对肿瘤的MRD机制的研究带来新的突破，此前本课题组应用差异蛋白质组学技术对人胃癌细胞株SGC7901和阿霉素耐药细胞SGC7901/ADR进行蛋白差异比较，应用高效液相色谱电喷雾电离串联质谱(high-perfomance liquid chematographyelectropray ionization mass spectrometry/mass spectrometry, HPLC-ESIMS/MS)方法对部分差异蛋白进行分析，结果发现人类S100钙结合蛋白A11(S100 calcium binding protein A11，S100A11)、肽脯异构酶(Peptidylprolyl cis-trans isomerase Pin1)在SGC7901中呈高表达，在SGC7901/ADR细胞中表达下调。为进一步验证质谱分析结果，本实验应用免疫细胞化学、Western-blot方法和RT-PCR(Reverse transcriptionpolymerase chain reaction)技术从蛋白质和基因水平检测S100A11、Pin1在SGC7901和SGC7901/ADR中的表达情况。
目的：验证人胃癌细胞株SGC7901和SGC7901/ADR中S100A11、Pin1的差异表达，为进一步探讨S100A11和Pin1与胃癌MDR的关系及为基因转染和RNA干扰奠定基础。
方法：将人胃癌SGC7901细胞和SGC7901/ADR细胞进行传代培养，分别接种在置于6孔板的盖玻片上正常培养过夜，应用免疫组化MaxVisin TM方法染色，观察S100A11和Pin1在两种细胞株中的差异表达，S100A11兔抗人多克隆抗体、Pin1兔抗人多克隆抗体(购置美国ProteinTech Group，Inc， Max VisinTM购置福州迈新生物技术开发有限公司)，兔抗人S100A11多克隆抗体1：100稀释；兔抗人Pin1多克隆抗体1：50稀释。人胃癌SGC7901细胞和SGC7901/ADR细胞进行传代培养，收集细胞；用RIPA裂解液提取SGC7901和SGC7901/ADR细胞总蛋白，考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，RNAiso Reagent裂解液分别提取两种细胞总RNA，用Western-b1ot和RT-PCR方法分别从蛋白质水平和mRNA水平对S100A11及Pin1在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的表达进行检测和分析。
结果：1．免疫细胞化学染色结果，S100A11和Pin1在SGC7901细胞中呈高表达。S100A11免疫细胞化学染色定位在细胞浆中，SGC7901细胞胞浆染色呈棕黄色-棕褐色，染色结果为强阳性(+++)，在SGC7901/ADR细胞中表达量明显下降，胞浆染色呈淡黄色，染色为弱阳性(+)；Pin1免疫细胞化学染色定位为胞浆胞膜型，SGC7901细胞胞浆胞膜着色呈黄色，染色结果为强阳性(++)；在SGC7901/ADR细胞中表达量明显降低，呈淡黄色，染色为弱阳性(+)。2．Western-blot免疫印迹结果，提取SGC7901和SGC7901/ADR细胞总蛋白， SGC7901细胞总蛋白浓度为3.5ug/ul，SGC7901/ADR细胞总蛋白浓度为3.2ug/ul。S100A11在SGC7901细胞中蛋白平均表达量0.69±0.13，明显高于SGC7901/ADR细胞平均表达量0.22±0.08，经两个独立样本的t检验，P＜0.05，两者具有显著性差异，表明S100A11在SGC7901细胞中呈高表达，Pin1在SGC7901细胞中蛋白平均表达量0.81±0.15，明显高于SGC7901/ADR细胞平均表达量0.52±0.09，P＜0.05，经两个独立样本的t检验，两者具有显著性差异，表明Pin1在SGC7901/ADR细胞中表达下调。3．RT-PCR结果，S100A11、Pin1在SGC7901细胞和SGC7901/ADR细胞中基因mRNA表达，结果显示S100A11和Pin1在两种细胞株中差异不具有显著性。在SGC7901细胞中S100A11基因总mRNA平均表达量为0.60±0.87，在SGC7901/ADR细胞中基因的mRNA平均表达量为0.59±0.78，经两个独立样本t检验，P＞0.05，无显著性差异。在SGC7901细胞中Pin1基因mRNA平均表达量为1.49±0.13，在SGC7901/ADR细胞中基因mRNA平均表达量为1.41±0.16，经两个独立样本t检验，P＞0.05，无显著性差异。
结论：1．S100A11和Pin1蛋白在人胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/ADR中存在差异表达，S100A11和Pin1蛋白在SGC7901细胞中呈高表达，而在SGC7901/ADR细胞中呈低表达。2．SGC7901细胞中S100A11和Pin1的mRNA含量与耐药细胞SGC7901/ADR中含量无明显差异，这两种蛋白在SGC7901细胞和SGC7901/ADR细胞中的差异表达不是SGC7901细胞合成增加或SGC7901/ADR细胞合成减少结果，而是合成后事件，可能与SGC7901细胞S100A11和Pin1蛋白降解减少或SGC7901/ADR细胞降解增多有关。3．S100A11、Pin1在SGC7901细胞和耐药株SGC7901/ADR细胞中差异表达，可能与胃癌MDR有关。