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葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)是一种在人、动物和环境中广泛存在的机会性致病菌,动物源葡萄球菌还可通过吞咽、舔舐鼻部或伤口,进入消化道、呼吸道甚至是血液中引起全身性疾病,在口腔疾病如龋病、牙周炎、牙髓炎等唾液中也能分离出大量的葡萄球菌。目前国内外已有部分报道在大熊猫的兽舍、致死性肺炎的呼吸道及牙齿异常的口腔中均分离出较多的葡萄球菌,但关于大熊猫源葡萄球菌的耐药性研究却未见报道。因此,本课题旨在研究大熊猫口腔源可培养细菌的种类及口腔源葡萄球菌的耐药性。试验选取幼年及成年大熊猫各15只,采集其口腔唾液样品60份(每只2份)。细菌分离纯化后,基于16s rRNA基因鉴定口腔可培养菌群种类,选取在大熊猫口腔细菌中分离最多的疑似葡萄球菌,进一步通过革兰氏镜检、生化鉴定、凝固酶试验结合鉴定葡萄球菌的种类。采用K-B纸片法及多重PCR研究葡萄球菌对12种抗生素的耐药情况及12种耐药基因的携带情况。结果表明,从大熊猫样本中分离到302株可培养细菌,主要分属于31个菌属的78种,以革兰氏阳性菌为主,葡萄球菌属、链球菌属、假单胞菌属、罗思氏菌属、肠杆菌属、金黄杆菌属、鞘氨醇杆菌属、不动杆菌属、克雷伯氏菌属为口腔优势菌群。其中共鉴定出了80株凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)(幼年39株,成年41株),未分离到凝固酶阳性葡萄球菌。78.75%的待测菌至少对一种抗生素耐药,超过一半的菌株呈多重耐药,五重耐药率达6.25%。幼年大熊猫葡萄球菌以耐2种抗生素为主(28.21%),成年大熊猫葡萄球菌以耐3种抗生素为主(31.71%)。其中以万古霉素的耐药率最高(68.75%),其次是阿奇霉素(51.25%),氨基糖苷类和四环素的耐药性均低于20%,仅幼年大熊猫葡萄球菌对环丙沙星、氯霉素敏感。同时还分离出48.75%的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),通过比较发现MRCNS的耐药性远高于No-MRCNS。在80株待测菌的耐药基因检测中,68.75%的菌株至少分离出1种抗性基因,以BlaZ基因分离率最高(41.25%),其次是mecA(40.00%),cfr(38.75%),VanB(25.00%)。80株葡萄球菌对万古霉素类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氯霉素类抗性基因的携带情况分别以VanB、BlaZ/mecA、aacA-aphD、erma/ermb、tetK和cfr基因为主。幼年大熊猫葡萄球菌主要以携带1-2种耐药基因为主(82.61%);成年大熊猫葡萄球菌主要以携带2-4种耐药基因为主(75.00%),其中最高携带了6种耐药基因。综上所述,80株葡萄球菌具有广泛的耐药性,其中以MRCNS的耐药水平较高,且成年大熊猫葡萄球菌的耐药性及携带耐药基因率均高于幼年大熊猫,证明大熊猫口腔源葡萄球菌已具有一定程度的耐药性,因此需加强对大熊猫及其生活环境的耐药监测,控制和减少耐药菌株的产生及传播。